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40510ESCollagenase IV膠原酶IV型
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具體成交價以合同協(xié)議為準- 40510ES 產(chǎn)品型號
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訪問次數(shù)：1595更新時間：2024-07-26 09:46:43
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產(chǎn)品簡介
| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 貨號 | 40510ES |
|---|---|---|---|
| 應用領域 | 醫(yī)療衛(wèi)生,生物產(chǎn)業(yè),制藥 |
產(chǎn)品介紹
Collagenase IV膠原酶IV型
膠原酶（Collagenase）是一種蛋白酶，一種肽鏈內(nèi)切酶，能夠特異性的識別Pro-X-Gly-Pro序列（該序列高頻率出現(xiàn)在膠原中，很少發(fā)現(xiàn)于其他蛋白中）并切割該序列中性氨基酸（X）和甘|氨酸（Gly）之間的肽鍵。許多蛋白酶都能水解單鏈且變性的膠原多肽，但膠原酶是*一種可以降解具有三股超螺旋結(jié)構的天然膠原纖維的蛋白酶，這種膠原纖維廣泛存在結(jié)締組織內(nèi)。
本品來源于溶組織梭菌（Clostridium histolyticum），是一種酶粗提物，不僅含有膠原酶（更準確的稱法為梭菌蛋白酶A（clostridiopeptidase A）），能夠降解天然膠原和網(wǎng)狀纖維。還含有其他的一些蛋白酶，多糖酶，脂酶等，分別能夠有效水解
結(jié)締組織和上皮組織細胞外基質(zhì)內(nèi)的其他蛋白、多糖和脂質(zhì)，使得本品非常適用于組織消化。
目前商業(yè)化提供的細菌膠原酶主要根據(jù)膠原酶活性的差異，分為四種類型：膠原酶I型，II型，III型和IV型，在應用上有所偏向：1）膠原酶I（Type I Collagenase）：含有比較均勻的各種酶活力（包括膠原酶，酪蛋白酶，梭菌蛋白酶，胰蛋|白酶活性）。通常用作上皮細胞、肝、肺、脂肪和腎上腺組織細胞的制備；2）膠原酶II（Type II Collagenase）：含有更高的梭菌蛋白酶活性，通常用于心臟、骨、肌肉、胸腺和軟骨等組織來源細胞的制備；3）膠原酶III（Type III Collagenase）：含有較低的蛋白酶活性，常用于乳腺細胞的制備；4）膠原酶IV（Type IV Collagenase）：含有低胰|酶活性，通常用于胰島細胞的制備，或者需要維持受體完整性的細胞制備實驗。
本品為IV型膠原酶，≥125 CDU/mg solid（CDU = collagen digestion units），特別適用于胰島組織的消化。
酶活力單位定義
在37℃，pH7.5 的條件下，5h內(nèi)水解膠原產(chǎn)生相當于1µM L-亮|氨酸的酶量定義為1個酶活力單位。
運輸和保存方法
室溫運輸。4℃避光保存，2年有效。儲存液-20℃避光凍存。
注意事項
為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。
使用方法
1. 膠原酶儲存液的配制
向每管100mg的膠原酶中加入100µL的含Ca2+、Mg2+的HBSS（Hank’s平衡|鹽溶液，含Ca2+、Mg2+），輕輕旋渦震蕩使其充分溶解，制備成1g/ml（即1000×）的儲存液。然后用低蛋白結(jié)合性的0.22μm的濾膜過濾除菌，分裝成小份量，然后于-20℃避光凍存。
使用前于冰上解凍，避免反復凍融。其用于組織和細胞分散的常用濃度為：0.5-2.5mg/ml，用于軟骨消化的常用濃度為1-2mg/ml，需要根據(jù)特定的實驗條件或者參考相應的文獻資料確定所需的*工作濃度。
2．組織的分離
1）使用無菌手術|刀或剪刀將組織切成3-4mm大小的組織塊；
2）利用含Ca2+、Mg2+的HBSS洗滌組織塊數(shù)次；
3）加入足量的含Ca2+、Mg2+的HBSS，使其浸沒組織塊，并加入膠原酶至需要工作濃度；
4）于37℃孵育4-18h。消化時使用水平搖床以及用3mM的CaCl2補充消化可以提高消化效率。
5） 已分散開的細胞可使用不銹鋼或尼龍網(wǎng)篩篩得，收集備用。未*解離的組織另外添加適量的新鮮膠原酶工作液于37℃繼續(xù)孵育；
6）利用不含膠原酶的HBSS洗滌收集的細胞數(shù)次；
7）細胞培養(yǎng)液重懸上述細胞，利用自動細胞計數(shù)器或其他方法計算活細胞密度。
8）于細胞培養(yǎng)皿上利用合適細胞培養(yǎng)基接種細胞。
3． 器官灌注
1）向37℃預熱的含Ca2+、Mg2+的HBSS中加入膠原酶，另添加3mM的CaCl2有助于提高分離效率；
2）按照已優(yōu)化的速率對相應的器官灌注膠原酶工作液；
3）將上述過程中回收的灌注液流經(jīng)不銹鋼或尼龍網(wǎng)篩，從而將已解離的細胞或小片段組織塊與較大團塊分離開來，未充分解離的組織需利用新鮮膠原酶工作液于37℃進一步孵育；
4）利用不含膠原酶的HBSS洗滌收集的細胞數(shù)次；
5）細胞培養(yǎng)液重懸上述細胞，利用自動細胞計數(shù)器或其他方法計算活細胞密度。
6）于細胞培養(yǎng)皿上利用合適細胞培養(yǎng)基接種細胞。
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