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滬鼎生物實(shí)驗(yàn)肺炎衣原體過程，讓我們用elisa法來檢驗(yàn)
閱讀：1223 發(fā)布時間：2014-3-13 檢驗(yàn)肺炎衣原體？我們知道elisa實(shí)驗(yàn)是比較常用的，具有屬于自己的優(yōu)點(diǎn)與特點(diǎn)，被常用于免疫學(xué)檢驗(yàn)中。今天我們要帶領(lǐng)大家了解的一個實(shí)驗(yàn)就是相關(guān)檢驗(yàn)肺炎衣原體，下面就來看一看，滬鼎生物實(shí)驗(yàn)肺炎衣原體過程，讓我們用elisa法來檢驗(yàn)。
我們這個實(shí)驗(yàn)的標(biāo)本需要取新鮮末梢血或靜脈血。如采血后24h內(nèi)不能進(jìn)行試驗(yàn)，分離血清后將其保存于一20℃環(huán)境中。在做檢測實(shí)驗(yàn)的時候，使樣本恢復(fù)至室溫。
實(shí)驗(yàn)中所需要用到的試劑：
1、濃縮酶聯(lián)物；
2、標(biāo)本稀釋液；
3、終止液；
4、陽性對照；
5、弱陽性對照；
6、預(yù)包被微孔板；
7、底物A、B；
7、陰性對照。
選用elisa方法，血清加到包被純化的肺炎衣原體抗原的微滴孔中，使之發(fā)生反應(yīng)，然后去除未結(jié)合的抗體，加入結(jié)合有HRP的抗人Ig抗體使之與已結(jié)合的抗體反應(yīng)，結(jié)合的HRP與發(fā)色底物發(fā)生顏色反應(yīng)。zui后，終止底物反應(yīng)，在酶標(biāo)儀上讀出光密度值。
實(shí)驗(yàn)檢驗(yàn)過程：
1、配制洗滌液 l瓶濃縮洗滌液加475ml蒸餾水。配好的洗滌液短期內(nèi)可置室溫環(huán)境中，長期可存于2—8℃環(huán)境中。
2、配制酶聯(lián)物 按1：101倍稀釋，即取1u1濃縮酶聯(lián)物加酶聯(lián)物稀釋液1 000ul(根據(jù)檢測標(biāo)本數(shù)量確定稀釋量)，未用完的丟棄。
3、待試劑盒平衡至室溫后，待測標(biāo)本按1；51稀釋，即取4tA血清與200u1標(biāo)本稀釋液混合。
4、將稀釋標(biāo)本置37℃環(huán)境中20min。
5、各加100ul陽性、弱陽性、陰性對照及已稀釋待測標(biāo)本上清液于相應(yīng)孔中，空白對照孔加100u1標(biāo)本稀釋液，蓋好反應(yīng)板，置37℃環(huán)境中30min。
6、甩盡板中液體，每孔用200～300ul洗滌液洗5次，每次均需拍干。
7、每孔加酶聯(lián)物100~1，蓋好反應(yīng)板，置37℃環(huán)境中30min。
8、甩盡板中液體，洗5次，每次拍干。
9、加底物A、B各1滴或各50tzl，混勻，置37℃環(huán)境中15min。
10、取出，加終止液1滴，用酶標(biāo)儀450nm測其OD值。若肉眼觀察則不加終止液，直接判斷結(jié)果。
實(shí)驗(yàn)過后，我們要做一個結(jié)果判斷：
1、陰性對照平均OD值須小于0．20。
2、弱陽性對照平均OD值須在0．20—0．65。
3、弱陽性對照與陰性對照的平均OD值之比須≥2。符合以上3個條件時，本試驗(yàn)結(jié)果可信，否則重復(fù)實(shí)驗(yàn)。
4、若待測標(biāo)本孔顯色比弱陽性對照孔深則判為陽性，反之為陰性。但在弱陽性對照值上下10％范圍內(nèi)再測1次，如確實(shí)高于弱陽性對照則可判為陽性。
以上就是我們?yōu)槟窒淼膶?shí)驗(yàn)全過程啦，上海滬鼎生物在這里為大家說幾個實(shí)驗(yàn)中的注意事項(xiàng)，這個實(shí)驗(yàn)結(jié)果須結(jié)合臨床表現(xiàn)、病史作出診斷后，方可采取適當(dāng)臨床處理。還有就是試劑盒雖然含有消除干擾因子的物質(zhì)，但仍可能有少量標(biāo)本難以除盡干擾。因此，如某標(biāo)本多項(xiàng)IgM均為陽性，應(yīng)考慮RF的干擾。
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