豬Pro IL-18 ELISA試劑盒

豬前體Pro白介素18（IL-18）ELISA試劑盒原理/說明書

廠家：上?；鄯f生物科技有限公司

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：1242635944（試劑之城）

產(chǎn)品貨號： EIA06986

使用前*閱讀說明書。本酶聯(lián)免疫試劑盒是基于經(jīng)典酶聯(lián)夾心技術(shù)原理，能測量豬Pro IL-18，只能用于研究用途，不得用于醫(yī)學(xué)診斷。

試劑盒原理

白細(xì)胞介素18 （白介素-18 ）是一個(gè)家族因子，白細(xì)胞介素18是一種能誘導(dǎo)IFN－γ產(chǎn)生的新型細(xì)胞因子。它的功能相似白細(xì)胞介素12 。它具有多種生物學(xué)功能，能促進(jìn)T細(xì)胞增殖，增強(qiáng)NK細(xì)胞的細(xì)胞毒作用，在誘導(dǎo)Th1細(xì)胞的分化成熟過程和Th1細(xì)胞為主的細(xì)胞免疫反應(yīng)中具有促進(jìn)和調(diào)節(jié)作用。所提供的ELISA Kit是典型的夾心法酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒（ELISA）。預(yù)先包被的抗體為多克隆抗體。檢測相抗體也為多克隆抗體，經(jīng)生物素（biotin）標(biāo)記。樣品和生物素標(biāo)記抗體先后加入酶標(biāo)板孔反應(yīng)后，PBS或TBS洗滌。隨后加入過氧化物酶標(biāo)記的親和素反應(yīng)；經(jīng)過PBS或TBS的*洗滌后用底物TMB顯色。TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的待測因子呈正相關(guān)。

試劑盒組成部分（96T）

需要而未提供的試劑和器材

1． 37℃恒溫箱。

2． 標(biāo)準(zhǔn)規(guī)格酶標(biāo)儀。

3． 自動(dòng)洗板機(jī)。

4． 單通道或多通道可調(diào)節(jié)移液器以及其吸頭。

5． 蒸餾水，容量瓶等

6． 干凈的試管和Eppendof管。

注意事項(xiàng)

1． 開啟試劑盒之前要室溫平衡至少30分鐘。

2． 配制各種試劑時(shí)，切記混勻！

3． 用戶在初次使用試劑盒時(shí)，應(yīng)將各種試劑管離心數(shù)分鐘，以便試劑集中到管底。

4． 建議所有標(biāo)準(zhǔn)品、樣本都做雙份檢測。

5． 要嚴(yán)格避免操作過程中酶標(biāo)板干燥。干燥會(huì)使酶標(biāo)板上生物成份迅速失活！

6． 為免交叉污染，要避免重復(fù)使用手中的吸頭和試管。

洗板方法

手工洗板方法：吸去（不可觸及板壁）或甩掉酶標(biāo)板內(nèi)的液體；在實(shí)驗(yàn)臺(tái)上鋪墊幾層吸水紙，酶標(biāo)板朝下用力拍幾次；將推薦的PBS或TBS洗滌緩沖液至少0.35ml注入孔內(nèi)，浸泡1-2分鐘。根據(jù)需要，重復(fù)此過程數(shù)次。

自動(dòng)洗板：如果有自動(dòng)洗板機(jī)，應(yīng)在熟練使用后再用到正式實(shí)驗(yàn)過程中。

樣品的準(zhǔn)備和保存

樣品如果不立即分析，應(yīng)分裝后冷凍保存，且避免反復(fù)凍融。

血清——用干凈試管收集血液，室溫凝固2小時(shí)或4℃過夜，離心1000×g 10分鐘，收集血清。立即分析或分裝后-20℃冷凍保存。

細(xì)胞培養(yǎng)、組織勻漿、體液——離心去除沉淀，立即分析或分裝后-20℃冷凍保存。

樣品稀釋的一般原則

用戶須查閱文獻(xiàn)了解標(biāo)本內(nèi)待測因子的含量，決定適當(dāng)?shù)南♂尡稊?shù)，以使稀釋后樣品中待測因子的濃度處于ELISA試劑盒的*檢測范圍。樣品的稀釋應(yīng)有詳細(xì)記錄。

試劑的準(zhǔn)備和保存

A. 標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋和使用：在使用前2小時(shí)內(nèi)準(zhǔn)備。將凍干品管內(nèi)加入1ml樣品稀釋液，*溶解后做倍比稀釋。稀釋后的標(biāo)準(zhǔn)品在2小時(shí)內(nèi)使用。

B．生物素標(biāo)記抗體工作液：在使用前2小時(shí)內(nèi)準(zhǔn)備。

1． 根據(jù)每孔需要0.1ml計(jì)算總的用量（實(shí)際配制時(shí)應(yīng)多配制0.1-0.2ml）。

2． 按10ul生物素標(biāo)記抗體加抗體稀釋液990ul的比例配制工作液。輕輕混勻。

C．親和素-過氧化物酶復(fù)合物（ABC）工作液的準(zhǔn)備：在使用前1小時(shí)內(nèi)準(zhǔn)備。

1． 根據(jù)每孔需要0.1ml計(jì)算總的用量（實(shí)配時(shí)應(yīng)多配制0.1-0.2ml）。

2． 按10ul親和素-過氧化物酶復(fù)合物（ABC）加ABC稀釋液990ul的比例配制工作液。輕輕混勻。

D.  TMB顯色工作液的準(zhǔn)備：在使用之前30分鐘，按TMB顯色液A 9份加 TMB顯色液B 1份的比例配制TMB顯色工作液。

操作程序

1． 確定本次檢測所需的已包被抗體的酶標(biāo)板孔數(shù)目。

2． 將倍比稀釋的標(biāo)準(zhǔn)品各0.1ml依次加入一排7孔中，1孔只加樣品稀釋液的作為對照。處理后的標(biāo)本按100ul每孔加入。

3． 酶標(biāo)板加上蓋，37℃反應(yīng)90分鐘。

4． 反應(yīng)后用自動(dòng)洗板機(jī)吸去酶標(biāo)板內(nèi)的液體；或甩去酶標(biāo)板內(nèi)液體，再對著吸水紙拍幾下。洗滌2次。

5． 將準(zhǔn)備好的生物素抗體工作液按每孔0.1ml依次加入。37℃反應(yīng)60分鐘。

6． 0.01M TBS或0.01M PBS洗滌3次，每次浸泡1分鐘左右。

7． 將準(zhǔn)備好的ABC工作液按每孔0.1ml依次加入。37℃反應(yīng)30分鐘。

8． 0.01M TBS或0.01M PBS洗滌5次，每次浸泡1-2分鐘左右。

9． 按每孔0.09ml依次加入已在37℃平衡30分鐘的TMB顯色液，37℃避光反應(yīng)，反應(yīng)過程中，要經(jīng)常的觀察，當(dāng)肉眼可見標(biāo)準(zhǔn)品的前3-4孔有明顯的梯度藍(lán)色，后3-4孔差別不明顯時(shí)，即可加入TMB終止液0.1ml/孔。（顯色反應(yīng)zui長不要超過30分鐘）。

10． 用酶標(biāo)儀在450nm測定O.D.值。

11． 根據(jù)樣品的吸光值在坐標(biāo)上找出對應(yīng)的濃度。用戶也可以使用各種應(yīng)用軟件來計(jì)算。應(yīng)記住由于樣品稀釋了N倍，其實(shí)際濃度應(yīng)該×N。

操作程序總結(jié)：

準(zhǔn)備試劑，樣品和標(biāo)準(zhǔn)品 

加入準(zhǔn)備好的樣品和標(biāo)準(zhǔn)品，37℃反應(yīng)90分鐘 

洗板2次，加入生物素化抗體工作液，37℃反應(yīng)60分鐘

洗板3次，加入ABC工作液，37℃反應(yīng)30分鐘

洗板5次，加入TMB顯色液，37℃反應(yīng)

加入TMB終止液

30分鐘之內(nèi)讀OD值

計(jì)算標(biāo)本待測因子含量

檢測范圍：1000pg/ml→15.6pg/ml。

敏感性：  ＜2pg/ml

特異性：  系統(tǒng)和其它細(xì)胞因子無交叉反應(yīng)。

保存：    -20℃ [短期內(nèi)（如兩周）可4℃]

有效期：  12個(gè)月（-20℃）。

用途：    用于體外定量分析液體標(biāo)本（通用型）。

References: 

1. Okamura H., et al. Nature 378, 88-91 （1995）  

2. Ushio S., et al. J. Immunol. 156, 4274-4279 （1996）  

3. Micallef M., et al. Eur. J. Immunol. 26, 1647-1651 （1996）  

4. Tao D, et al. Cell Immunol. 173, 230-235 （1998）  

5. M. Taniguchi, et al. J. Immunol. Methods 206, 107-113 （1997）