小鼠氧化低密度脂蛋白(OxLDL)Elisa試劑盒實驗原理:
用純化的抗體包被微孔板,制成固相載體,往包被抗該指標(biāo)抗體的微孔中依次加入標(biāo)本或標(biāo)準(zhǔn)品、生物素化的抗該指標(biāo)抗體、HRP標(biāo)記的親和素,經(jīng)過*洗滌后用底物TMB顯色。TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的該指標(biāo)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),計算樣品濃度。
小鼠氧化低密度脂蛋白(OxLDL)Elisa試劑盒酶標(biāo)儀的使用過程中的一些問題:
1.閾值可疑范圍的設(shè)定 一般酶標(biāo)儀閾值矩陣設(shè)定可設(shè)定陰性、可疑、陽性3個范圍。有經(jīng)驗表明可疑范圍的設(shè)定要設(shè)定為臨界上下15%(也稱灰色區(qū))為宜;同時陰性范圍下限和陽性范圍應(yīng)該充分考慮到影響ELISA結(jié)果因素的存在,可疑范圍上限必須考慮到雙波長情況下出現(xiàn)負(fù)吸光度值和超范圍報告影響結(jié)果的可能性。“灰色區(qū)"的結(jié)果的真實性是ELISA定性測定中zui需要把握的環(huán)節(jié),也是實驗室引起醫(yī)療糾紛的主要方面,因此必須對可疑結(jié)果進(jìn)行復(fù)檢,用兩種試劑盒。
2.樣板程序文件設(shè)定 一個實驗室同一試驗可能使用不同廠家試劑盒,但不同試劑盒規(guī)定的設(shè)定對照數(shù)量、閾值判定標(biāo)準(zhǔn)等均可能不*,酶標(biāo)儀所設(shè)樣板程序也不*。為了使用方便,可在樣板程序文件中用后綴加以區(qū)別。
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