超低IgG胎牛血清:通過親和層析工藝去除胎牛血清中的γ球蛋白,
使FBS γ球蛋白含量減到zui低,一般IgG≤5ug/ml生物學活性不變。
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一、血清分類:
胎牛血清、透析型胎牛血清 、超低IgG?胎牛血清 、干細胞培養(yǎng)胎牛血清 、特殊用途胎牛血清? 、活性炭/葡萄糖處理胎牛血清、胎牛血清替代物 、小牛血清 、新生?牛血清 、加強型小牛?血清 、補鐵小牛血清 、成牛血清 、供體?馬血清 、兔血清 、雞血清 、豬血清 、馬血清 、其他動物?血清 、合成血清替代品?。
二、血清作用
牛血清是細胞培養(yǎng)中用量zui大的天然培養(yǎng)基,含有豐富的細胞生長必須的營養(yǎng)成份,具有極為重要的功能。
- 提供能促使細胞指數(shù)生長的激素、基礎培養(yǎng)基中沒有或含量微小的營養(yǎng)物,以及某些低分子營養(yǎng)物質;
- 提供結合蛋白,識別維生素、脂類、金屬離子,并與有毒金屬和熱源物質結合,起解毒作用;
- 是細胞貼壁、鋪展生長所需因子的來源;
- 起酸堿度緩沖液作用;
- 提供蛋白酶抑制劑,細胞傳代時使剩余胰蛋白酶失活,保護細胞不受損傷。
三、血清保存注意事項:
(1)需要長期保存的血清必須儲存于-20℃ - 70℃ 低溫冰箱中.4℃冰箱中保存時間切勿超過1個月.由于血清結冰時體積會增加約10%,因此,血清在凍入低溫冰箱前,必須預留一定體積空間,否則易發(fā)生污染或玻璃瓶凍裂.
(2)熱滅活是指56℃, 30分鐘加熱已*解凍的血清.加熱過程中須規(guī)則搖晃均勻.此熱處理的目的是使血清中的補體成分(complement)滅活.除非必須,一般不建議作此熱處理,因為熱處理會造成血清沉淀物顯著增多,而且還會影響血清的質量.補體參與反應有:細胞毒作用, 平滑肌細胞收縮, 肥大細胞和血小板釋放組胺, 增強吞噬作用, 促進淋巴細胞和巨噬細胞發(fā)生化學趨化和活化.
(3)瓶裝血清解凍需采用逐步解凍法:-20℃ 至 -70℃ 低溫冰箱中的血清放入4℃冰箱中溶解1天.然后移入室溫,待全部溶解后再分裝.在溶解過程中需不斷輕輕搖晃均勻(小心勿造成氣泡),使溫度與成分均一,減少沉淀的發(fā)生.切勿直接將血清從-20℃進入37℃解凍,這樣因溫度改變太大,容易造成蛋白質凝集而出現(xiàn)沉淀.
(4)一般廠商提供的血清為無菌,無需再過濾除菌.如發(fā)現(xiàn)血清有懸浮物,則可將血清加入培養(yǎng)液內一起過濾,切勿直接過濾血清.
(5)血清中的沉淀物 絮狀物:主要是血清中的脂蛋白變性及解凍后血清中纖維蛋白造成,這些絮狀物不會影響血清本身的質量.可用離心3000rpm, 5分鐘去除,也可不用處理. 顯微鏡下"小黑點":經過熱處理過的血清,沉淀物的形成會顯著增多.有些沉淀物在顯微鏡下觀察象"小黑點",常誤認為血清受污染.一般情況下,此小黑點不會影響細胞生長,但如果懷疑血清質量,則應立即停止使用,更換另一批號的血清.
(6)切勿將血清在37℃放置太久,否則血清會變得渾濁,同時血清中的有效成分會破會而影響血清質量.
四、血清常見問題:
保存血清的方法血清應保存在-5C至-2OC。然而,若存放于4C時,請勿超過一個月。若您一次無法用完一瓶,建議將無菌分裝血清至恰當?shù)臏缇萜鲀?,再放回冷凍?
如何解凍血清才不會使產品質量受損?
將血清從冷凍箱取出后,先置于2-8C冰箱使之溶解,然后在室溫下使之全溶。但必須注意的是,溶解過程中必須規(guī)則地搖晃均勻。
如何避免沉淀物的產生
(1)解凍血清時,請按照所建議的逐步解凍法(-2O。C至4。C至室溫),若血清解凍時改變的溫度太大(如-20。C至37。C),實驗顯示非常容易產生沉淀物。
(2)解凍血清時,請隨時將之搖晃均勻,使溫度及成分均一,減少沉淀的發(fā)生
(3)請勿將血清置于37。C太久。若在37。C放置太久,血清會變得混濁,同時血清中許多較不穩(wěn)定的成分也會因此受到損害,而影響血清的質量。
(4)血清的熱滅活非常容易造成沉淀物的增多,若非必要,可以無須做此步驟。
(5)若必須做血清的熱滅活,請遵守56。C,30分鐘的原則,并且隨時搖晃均勻。溫度過高,時間過久或搖晃不均勻,都會造成沉淀物的增多。血清解凍后發(fā)現(xiàn)有絮狀沉淀物出現(xiàn),該如何處理? 欲去除這些絮狀沉淀物,可以將血清分裝至無菌離心管內,以400g稍微離心,上清液即可接著加入培養(yǎng)基內一起過濾。但不建議以過濾的方法去除這些絮狀沉淀物,因為它可能會阻塞過濾膜。
何謂熱滅活?
一般是以56C,30分鐘來處理已解凍的血清,因為此加熱步驟,可以使補體去活化,而補體所參與的反應有:溶細胞活性,平滑肌的收縮,肥大細胞和血小板組胺的釋放,增強吞噬作用,淋巴細胞、巨噬細胞的趨化和激活。
有必要做熱滅活嗎?
實驗顯示,經過正確處理的熱滅活血清,對大多數(shù)的細胞而言是不需要的。經此處理過的血清對細胞的生長只有微小的促進,或*沒有任何作用,甚至通常因為高溫處理影響了血清的質量,而造成細胞生長速率的降低。而經過熱處理的血清,沉淀物的形成會顯著的增多,這些沉淀物在倒立顯微鏡下觀察,像是 "小黑點",常常會讓研究者誤以為是血清遭受污染,而把血清放在37C環(huán)境中,又會使此沉淀物更增多,使研究者誤認為是微生物的分裂擴增。
因此我們建議您,若非必須,您可以不需要做熱處理這一步。如此一來,不但節(jié)省您寶貴的時間,更確保您血清的質量!另外,購買已滅活成品也不失一個捷徑,請在購買的時候注意詢問廠家是否是已滅活血清。