人CD152,人細胞毒性T淋巴細胞相關(guān)抗原4(CTLA-4/CD152)ELISA試劑盒
目的:本試劑盒用于測定人血清,細胞上清及相關(guān)液體樣本中細胞毒性T淋巴細胞相關(guān)抗原4(CTLA-4)含量。
原理:本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標本中人細胞毒性T淋巴細胞相關(guān)抗原4(CTLA-4)水平。用純化的人細胞毒性T淋巴細胞相關(guān)抗原4(CTLA-4)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入細胞毒性T淋巴細胞相關(guān)抗原4(CTLA-4),再與HRP標記的細胞毒性T淋巴細胞相關(guān)抗原4(CTLA-4)抗體結(jié)合,形成抗體-抗原-酶標抗體復(fù)合物,經(jīng)過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的細胞毒性T淋巴細胞相關(guān)抗原4(CTLA-4)呈正相關(guān)。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標準曲線計算樣品中人細胞毒性T淋巴細胞相關(guān)抗原4(CTLA-4)濃度。
組成成分:封板膜+密封袋+酶標包被板+標準品+標準品稀釋液+酶標試劑+樣品稀釋液+顯色劑A液+顯色劑B液+終止液+濃縮洗滌液。
范圍:0.5 ng/mL -11ng/mL
保存溫度:2-8℃
有效期:6個月
性能:樣品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值為0.92以上;批內(nèi)與批間應(yīng)分別小于9%和15%
實驗前準備:
樣本處理及要求:
1. 血清:室溫血液自然凝固10-20分鐘,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清,保存過程中如出現(xiàn)沉淀,應(yīng)再次離心。
2. 血漿:應(yīng)根據(jù)標本的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑,混合10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)該再次離心。
3. 尿液:用無菌管收集,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照實行。
4. 細胞培養(yǎng)上清:檢測分泌性的成份時,用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。檢測細胞內(nèi)的成份時,用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細胞懸液,細胞濃度達到100萬/ml左右。通過反復(fù)凍融,以使細胞破壞并放出細胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。
5. 組織標本:切割標本后,稱取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆谩吮救诨笕匀槐3?-8℃的溫度。加入一定量的PBS(PH7.4),用手工或勻漿器將標本勻漿充分。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。分裝后一份待檢測,其余冷凍備用。
6. 標本采集后盡早進行提取,提取按相關(guān)文獻進行,提取后應(yīng)盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,可將標本放于-20℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融.
7. 不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。
所需設(shè)備耗材:酶標儀(通用)+洗板機(可無)+移液器+燒杯
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