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上海源葉生物科技有限公司
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瘋牛病IDEXXEIA檢測(cè)方法
2011-7-6 閱讀(867)
本方法（IDEXX HerdChek BSE EIA test）由美國(guó)IDEXX公司開發(fā)研制，是一種快速簡(jiǎn)捷的酶聯(lián)免疫測(cè)定方法，2004年通過美國(guó)和歐盟認(rèn)證。
該方法的原理是將牛腦組織制成勻漿懸液，用稀釋液處理組織懸液，將處理后的腦組織懸液加入到包被有能選擇性地捕獲PrPSc的化學(xué)聚合物（英國(guó)Microsens公司技術(shù)）的微孔板中，室溫孵育，洗滌后加入辣根過氧化物酶標(biāo)記的針對(duì)PrP分子保守區(qū)的單抗，TMB顯色，測(cè)定OD值，判斷結(jié)果。
本方法的敏感性為100％，特異性為99．99％。本方法的特點(diǎn)在于不需要蛋白酶K消化，無(wú)需離心，無(wú)需特別溫度的孵育，所有步驟都在室溫下進(jìn)行，4．5h內(nèi)出結(jié)果，無(wú)需豐富的實(shí)驗(yàn)經(jīng)驗(yàn)，實(shí)驗(yàn)廢物少，所需實(shí)驗(yàn)空間小。
瘋牛病的IDEXXEIA檢測(cè)方法主要步驟如下。
（1）樣品準(zhǔn)備 收集樣品（腦閂部組織），勻漿，用稀釋液稀釋勻漿液。
（2）捕獲PrPSc將稀釋好的勻漿液加入到BSE病原捕獲板中，由seprion親和配體捕獲。
（3）添加調(diào)節(jié)緩沖液 洗去捕獲板中未結(jié)合的樣品，加入調(diào)節(jié)緩沖液并孵育，使捕獲的PrPSc變性，以便充分暴露抗原位點(diǎn)。
（4）添加HRP標(biāo)記的單抗 洗去調(diào)節(jié)緩沖液，加入HRP標(biāo)記的單抗并孵育。標(biāo)記了HRP的PrP單抗結(jié)合上PrPSc。
（5）添加底物和終止液 洗去未結(jié)合的單抗，加入底物并孵育。當(dāng)有陽(yáng)性時(shí)出現(xiàn)藍(lán)色，滴加HCl終止液終止反應(yīng)，顏色則變成了黃色。
（6）讀值和分析 用酶標(biāo)儀讀板，數(shù)值用IDEXXxChek軟件分析。
