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上海源葉生物科技有限公司
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炭疽的實驗室檢驗診斷技術(shù)
2011-6-11 閱讀(796)
①檢驗材料的采取 疑為因炭疽死亡的動物尸體，通常不做剖檢，應先自末梢血管采血涂片鏡檢，作初步診斷。不進行剖檢的尸體可作局部解剖，采取小塊脾臟，然后將切口用浸透了濃漂白粉液的棉花或紗布堵塞，脾臟妥為包裝后送檢。
②鏡檢 取病畜瀕死時或剛死亡動物的血液作涂片標本，用瑞氏染色法或姬姆薩染色法染色，牛羊炭疽經(jīng)常見到數(shù)量很多的有莢膜炭疽桿菌單個或成對存在，偶有短鏈，菌端平切，莢膜呈深紅紫色。豬炭疽要采取病變部淋巴結(jié)或滲出液涂片檢查。
③培養(yǎng)檢查 無菌采取病畜瀕死期或剛死動物的病理材料，直接接種于普通瓊脂平板及肉湯培養(yǎng)基上，置37℃培養(yǎng)18—24h，檢查有無炭疽桿菌生長。如果檢查材料已經(jīng)陳舊或污染時，可將血液或組織乳劑先放到肉湯中加溫65～70~C經(jīng)lOh，殺死無芽孢的細菌，然后吸取o．$ml接種于普通瓊脂平板培養(yǎng)基上進行分離培養(yǎng)。
檢查生長的菌落，如有疑似炭疽的菌落，則應取得純培養(yǎng)。為了鑒定分離的細菌為炭疽桿菌，必須接種各種培養(yǎng)基，觀察菌體的形態(tài)、菌落的形態(tài)及生化反應，同時接種試驗動物觀察菌體的致病能力。炭疽桿菌與偽炭疽桿菌有某些類似之處。
④串珠試驗 炭疽桿菌在適當濃度青霉素溶液作用下，菌體腫大形成串珠，這種反應為炭疽桿菌所*，因此可用此法將之與其他需氧芽孢桿菌相鑒別。取培養(yǎng)4～12h的肉湯培養(yǎng)物三管，其中兩管各及時加入每毫升含5單位和10單磺嗝顧厝芤?．5ml（zui終濃度含0．5單位和1．0單位）混勻，另一管加生理鹽水0．5ml作為對照。置37~C孵育1—4h（時間過久，串珠繼續(xù)膨脹，容易破裂），取出加入20％福爾馬林溶液0．Stol，固定10min后，涂片顯微鏡檢查，找到典型串珠狀者可判定為炭疽桿菌。
⑤炭疽桿菌莢膜熒光抗體染色
a．抗炭疽桿菌沉淀素熒光抗體的制備 取生物制品廠生產(chǎn)的炭疽沉淀血清，或用炭疽桿菌免疫家兔制得抗血清，將硫酸銨沉淀法提純所得球蛋白用異硫氰酸熒光素標記。
b．以病死畜的血液或脾臟涂片，固定后滴加標記過的抗體，滿蓋玻片，置室溫或37℃染色30min，傾去熒光抗體液，在pH8緩沖鹽水中浸洗10rain（中間換水1次），zui后用蒸餾水輕輕沖洗，晾干。
巳在熒光顯微鏡下檢查，找到菌體周圍有肥厚或較薄的發(fā)熒光的莢膜，菌體較暗或不被染色者可判為陽性。但發(fā)現(xiàn)不帶莢膜而發(fā)均勻熒光的桿菌，則不能判為炭疽桿菌。
