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上海源葉生物科技有限公司
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炭疽流式細(xì)胞分析技術(shù)
2011-6-8 閱讀(1006)
流式細(xì)胞術(shù)（flow cytometry，F(xiàn)CM）是一種可以對(duì)細(xì)胞或亞細(xì)胞結(jié)構(gòu)進(jìn)行快速測(cè)量的新型分析技術(shù)和分選技術(shù)。其特點(diǎn)是：
①測(cè)量速度快，zui快可在1s內(nèi)計(jì)測(cè)數(shù)萬(wàn)個(gè)細(xì)胞；
②可進(jìn)行多參數(shù)測(cè)量，可以對(duì)同一個(gè)細(xì)胞做有關(guān)物理特性、化學(xué)特性的多參數(shù)測(cè)量，并具有明顯的統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；
③是一門綜合性的高科技方法，它綜合了激光技術(shù)、計(jì)算機(jī)技術(shù)、流體力學(xué)、細(xì)胞化學(xué)、圖像技術(shù)等眾多領(lǐng)域的知識(shí)和成果；
④既是細(xì)胞分析技術(shù)，又是的分選技術(shù)。FCM的數(shù)據(jù)顯示方式包括單參數(shù)直方圖（his-togram）、二維點(diǎn)圖（dot-plot）、二維等高圖（con-tour）、假三維圖（pseudo 3D）和列表模式1istmode）等。流式細(xì)胞儀分析技術(shù)是一種重要的免疫學(xué)技術(shù)平臺(tái)，可以實(shí)現(xiàn)快速敏感地檢測(cè)微生物。與傳統(tǒng)免疫熒光和ELISA檢測(cè)技術(shù)相比，它可以將散射信號(hào)（scatter signal）和熒光強(qiáng)度結(jié)合起來(lái)分析zui終結(jié)果，Stopa等用純芽孢試驗(yàn)表明，與近緣菌株交Y-N．應(yīng)的散射信號(hào)和熒光強(qiáng)度與同種反應(yīng)的不同，這就增加了流式細(xì)胞儀分析技術(shù)的選擇性和特異性，降低了假陽(yáng)性率，這一結(jié)論有待檢測(cè)現(xiàn)場(chǎng)標(biāo)本驗(yàn)證。用流式細(xì)胞分析技術(shù)的另一優(yōu)點(diǎn)就是可以進(jìn)一步限制熒光強(qiáng)度在結(jié)果評(píng)價(jià)中的作用，我們可以限定一個(gè)區(qū)域內(nèi)必須出現(xiàn)熒光才能判斷為陽(yáng)性，而不是單憑強(qiáng)度漂移來(lái)判定。但是，必須注意的是，當(dāng)標(biāo)本中含有大量待測(cè)細(xì)菌時(shí)（>107CFU／m1）會(huì)出現(xiàn)前帶現(xiàn)象降低熒光強(qiáng)度。
用流式細(xì)胞儀分析細(xì)菌或芽孢前首先應(yīng)確定待檢對(duì)象是否有自發(fā)熒光，研究表明，Sterne株有白發(fā)熒光，而Ames株和Vollum株則沒(méi)有自發(fā)熒光。還要測(cè)定熒光抗體結(jié)合物有無(wú)自發(fā)熒光。然后，就可以確定結(jié)合物對(duì)不同株的反應(yīng)性略有差異。一般流式細(xì)胞分析技術(shù)能檢測(cè)103個(gè)／m1以上的細(xì)菌或芽孢。所用時(shí)間不等。Stopa等發(fā)展了一種僅用5min檢測(cè)炭疽芽孢桿菌芽孢的流式細(xì)胞分析技術(shù)，并且能區(qū)分芽孢的死活。Dang等研究了芽孢滅活方法對(duì)流式細(xì)胞儀檢測(cè)的影響。結(jié)果表明，無(wú)論是用多抗，還是用單抗，檢測(cè)的熒光都發(fā)生了漂移，但是單抗檢測(cè)信號(hào)明顯降低，相反，多抗檢測(cè)信號(hào)大大增加。
