英藍滲析離子色譜法測定維他命果汁中的鈣

歐陽云¹，容曉文²

(1.湖南省桂陽縣疾病預防控制中心；2.瑞士萬通中國有限公司)

摘 要:建立英藍滲析離子色譜法測定維他命果汁中鈣的方法。樣品用去離子水稀釋，通過英藍滲析直接進入離子色譜系統(tǒng)分析。在1 mg/L～5 mg/L范圍內線性關系良好（r=0.9999）。樣品峰面積的RSD（n=7）為0.902% ～1.39%。加標回收率為97.9%～104.5%。方法與國標原子吸收分光光度法進行可行性對比試驗（t=0.321， p＞0.5），二者之間無顯著性差異，本法簡單易行、快速、基體干擾少。適用于檢測含鈣的維他命果汁飲料。

關鍵詞: 英藍滲析；離子色譜；維他命果汁；鈣

Determination of Calcium in Vitamin Juice by Online-dialysis and Ion Chromatography

OUYANG Yun¹，RONG Xiao Wen²

(1.Guiyang Center for Disease Control and Prevention,Huannan Guiyang,424400；           

2.Metrohm China Ltd.,Guangzhou ,510070)

Abstract: The method for determination the calcium in vitamin juice by online dialysis ion chromatography is established.Vitamin is diluted in pure water,and then directly determined by online dialysis-IC。The Correlation coefficient was 0.9999 in 1mg/L-5mg/L; The RSD of peak area was 0.902%-1.39%(n=7).The recovery rate was 97.9%-104.5%. This method is featured by accurate,quick,simple,good reproducible and high automatic.

Key words:Online dialysis；ion chromatography;vitamin juice；Calcium

鈣是人體所*的營養(yǎng)素之一，對人體的生長與發(fā)育，疾病與健康、衰老與死亡起重要作用，鈣是人體內zui豐富的礦物質，參與人體整個生命過程。每天攝入鈣量足夠，才能維持人體正常的新陳代謝，增強人體對生活環(huán)境的適應力。含鈣的維他命果汁是人體中鈣的比較好的補充來源,食品飲料中主要添加以丙酸鈣做為鈣的來源，具有防腐和提供鈣源作用。目前測定鈣原子吸收光譜法^[1]，但是樣品需經消化處理后方能測定，而且檢測過程易受污染。滴定法（EDTA法）^[1]雖然經典成熟，不要求設備，但操作過程煩瑣、耗時。具有英藍滲析超濾系統(tǒng)的離子色譜儀對骯臟樣品有自動凈化處理功能^[2]，為此建立離子色譜法測定維他命果汁中鈣的方法, 樣品稀釋后直接進樣測定，測量結果滿意。

1. 材料與方法

1.1  儀器與設備

1.1.1  Metrohm-881型離子色譜儀、Metrohm-858自動進樣器（瑞士萬通），配有色譜柱恒溫箱、智能電導檢測器、智能低脈沖串聯(lián)式雙活塞往復泵、電子六通進樣閥、雙通道化學抑制泵，色譜工作站，英藍超濾滲析系統(tǒng)；C18固相萃取柱；0.45um的濾膜；Direct-Q^TM5超純水器。ZEEnit700原子吸收分光光度計。

1.2  試劑  

鈣標準溶液1000mg/L :Fluka；2，6-吡啶二羧酸：aladdin；硝酸：優(yōu)級純，國藥集團；電阻率大于18.25MW超純水。

1.3  色譜條件 

色譜柱：Metrosep  C  4  150（150mm×4 mm）+ Metrosep  C  4 Guard/4陽離子柱保護柱；淋洗液：1.7mmol/L硝酸+0.05mmol/L2，6-吡啶二羧酸+10%乙腈；流速：1mL/min；壓力7.5Mpa；柱溫25℃；進樣體積：10μL，非抑制電導檢測器。

1.4  樣品前處理

取樣品用加入2mmol/L硝酸根據(jù)含量適當稀釋混合，搖勻，通過瑞士萬通英藍超濾系統(tǒng)直接取樣進入離子色譜柱分析。

2   結果與分析

2.1  色譜柱的選擇  

Metrosep C 4 150（150mm×4 mm）色譜柱的離子交換功能基為磺酸鹽，與Metrosep C  3  150（150mm×4 mm）相比，二種色譜柱淋洗條件均為硝酸+2，6-吡啶二羧酸，但是Metrosep C  3  150（150mm×4 mm）；鈣的出峰時間在25min左右，分析周期長，而且峰形對稱型差，有拖尾現(xiàn)象；Metrosep C 4 150（150mm×4 mm）用1.7mmol/L HNO3；鈣的出峰時間在13min左右，而且峰形對稱，分析周期短。所以選用Metrosep C 4 150柱。見圖1

圖1  樣品溶液分離Metrosep C 4 250柱色譜圖

1. 淋洗液條件的選擇

為了防止鈣、鎂離子的互相干擾，提前分離出鈣離子峰，淋洗液固定選擇1.7mmol/L硝酸+10%乙腈、2，6-吡啶二羧酸分別從0.01mmol/L、0.02、0.04、0.06、0.08、0.10mmol/L配制，從峰形、出峰時間上選擇，zui終選定1.7mmol/L硝酸+0.05mmol/L2，6-吡啶二羧酸+10%乙腈作為淋洗液^[3]。見

圖2，圖3。

圖

圖2 不加2，6-吡啶二羧酸分離色譜圖

圖3 加2，6-吡啶二羧酸分離色譜圖

2.3  樣品前處理的選擇

2.3.1   樣品處理方法的對比 

樣品分別用超純水和2mmol/L硝酸稀釋，從色譜圖中可見，同樣樣品硝酸稀釋的方式靈敏度更好。圖3為純水稀釋的色譜圖，圖4為2mmol/L硝酸稀釋的色譜。

圖4 純水稀釋

圖5  2mmol/L硝酸稀釋

2.4 線性范圍、檢出限

分別配制1.0 mg/L、2.0 mg/L、3 .0mg/L、4 .0mg/L、5.0 mg/L的鈣標準溶液，按選定的條件進行檢測，然后直接由軟件計算分析，結果表明，在1.0 mg/L~5.0 mg/L濃度范圍內，以質量濃度為橫坐標，峰面積為縱坐標進行線性回歸，繪制標準曲線，檢出限以三倍（s/n=3）的信噪比，軟件自動計算。結果見表1。

表1  鈣線性方程、相關系數(shù)和檢出限

S—測量峰面積

2.5  樣品分析及回收率實驗、精密度試驗

對樣品中含60.6 mg/100ml鈣的樣品制備液，經0.45um的濾膜過濾后進入色譜柱分析，根據(jù)樣品的色譜峰面積大小由軟件直接計算出含量。對樣品進行三水平的加標回收試驗。每個添加水平測定7次，精密度由軟件自動分析計算。手動計算回收率，結果見表2。

表2 樣品測量結果的加標回收率和精密度試驗（n=7）

2.6  兩種方法測定結果的比較    

樣品經消化處理后，按國家標準GB/T5009.92—2003食品中鈣的測定*法，原子吸收分光光度法測定，比較兩種測定果汁中鈣方法的優(yōu)缺點。認為離子色譜法更加*于原子吸收測定分析果汁的鈣。兩種方法對8份樣品同時測定，結果見表3。

表3  兩種方法測定果汁中鈣含量（mg/L）

對兩組結果進行方差分析。 方差齊性檢驗，從F看，數(shù)據(jù)的F為0.0000443<4.60011(F crit),從p看，p值為0.994775>臨界值0.05，說明兩組數(shù)據(jù)沒有顯著的差異。按照0.05的檢驗水準認為兩組來自總體方差是相等的。兩種方法組間變異和組內變異比較，拒絕H0，認為兩種測定方法得到的結果差別沒有統(tǒng)計學意義。說明兩種方法測定的樣品結果一致。

3  結論

丙酸鈣在硝酸的作用下分解成離子態(tài)，2，6-吡啶二羧酸對鈣、鎂離子起絡合作用，具有穩(wěn)定鈣、鎂離子，且形成的絡合物在淋洗液作用下，鈣離子的移動速度大于鎂離子的移動速度，形成對稱色譜峰，提前出峰的作用。從而有效避免基體復雜，干擾性大的缺點，本文對離子色譜法測定維他命果汁中的鈣的測定方法進行探討。測定表明，該方法簡單易行，結果準確，回收率好,靈敏度高，。

參考文獻

[1] 蔣煒，烏尼爾，高娃等. 乳飲料中游離鈣含量檢測方法的研究 [J]. 中國食品工業(yè)，2011，9：326—327。

[2] 食品衛(wèi)生檢驗方法理化部分（一）【M】GB/T5009.91—2003 655—660。

[3] 王宇昕; 于泓離子色譜法測定水果和飲料中Na~+、NH_4~+、K~+、Mg~(2+)、Ca~(2+)、Zn~(2+)的含量 材料物理與化學(專業(yè)) 博士論文 2000年度