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實驗室透析常見問題解答(一)
Q1:如何準備透析膜管?
透析膜管的準備因膜管材質和生產工藝的差別而有所不同。注意,我們不推薦煮沸處理,因其可能損壞膜管并改變膜孔徑。
Q2:透析的原理是什么?一般需要多長時間才能完成?
透析是指溶質在濃度梯度的驅使下,選擇性擴散通過半透膜,從而達到大/小分子分離,膜兩側濃度平衡,即小顆粒的溶質通過膜,而大分子物質不能通過,被截留在膜另一邊。
如果將樣品置于透析膜管內,通過置換膜管外部的透析緩沖液,可將小顆粒物質清除,從而達到純化大分子物質的目的。一般來說,一天之內置換3-5次緩沖液,然后在室溫條件下,放在攪拌臺上隔夜透析,即可達到的透析結果。標準的透析操作一般需要16-24小時。許多因素會影響透析效率,包括:擴散系數(shù)、pH值、溫度、時間、物質濃度、樣品體積、透析緩沖液體積、透析緩沖液的置換次數(shù)、膜表面積、膜厚度、分子帶電荷及緩沖液攪拌速率。
Q3:透析一個樣品需要多少體積的透析緩沖液?緩沖液置換頻率怎么安排?
透析緩沖液的體積越大,小分子擴散的驅動力越大。我們一般推薦緩沖液和樣品的體積比為100:1。當擴散速率降低,膜兩側溶液趨于平衡時,通過置換緩沖液,可維持小分子擴散驅動力和透析速率。我們一般推薦在12-24小時內,置換緩沖液2到3次,具體安排如下:
*次緩沖液置換:透析開始后2-3小時
第二次緩沖液置換:透析開始后4-5小時
zui后一次緩沖液置換:透析隔夜之前
Q4:如何選擇正確的截留分子量(MWCO)?
截留分子量應該竟可能的大,以使透析速率zui大化。但是,為了獲得zui大的樣品回收率,選擇的截留分子量應至少為需純化的大分子物質分子量的一半。對于需對幾種分子進行分離的應用,分子之間的分子量差至少為5倍,才能完成有效的膜透析。若不能滿足分子量差的要求,可能需要使用其它的分離技術,如色譜方法或切向流過濾。
Q5:哪種膜的蛋白質結合率zui低?
每種膜對不同的分子具有不同的親和性。對于球狀蛋白,相對的結合親和性由低到高為CE< RC
Q6:怎樣為膜管選擇合適大小的膜夾?
標準RC膜(Spectra/Por 1-7)和生物技術級RC膜由柔韌的再生纖維素聚合物制造,可使用任何一種透析膜夾密封。生物技術級CE & PVDF膜由相對剛性的聚合物制造,需要使用相對溫和的通用膜夾。鑒于通用膜夾對于所有類型的膜管都能起到很好的密封作用,如不確定選擇哪種膜夾合適,使用通用膜夾即可。標準膜夾一般只用于標準級RC膜管。
膜夾的密封寬度一般需比膜管的扁平寬度長4-10 mm。通用膜夾的zui小密封寬度為50 mm。對于所有扁平寬度規(guī)格的膜管,均有相應的膜夾可供選擇。
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