英文名稱：Plasmid Maxiprep Kit
中文名稱 :離心法質(zhì)粒大量提取試劑盒
編號(hào):PD1511-01
規(guī)格: 10次
品牌：biomiga
佰易聚生物商城提供的分子生物學(xué)試劑和試劑盒、美國(guó)聯(lián)合碳化和美國(guó)光譜醫(yī)學(xué)透析袋、培養(yǎng)基和培養(yǎng)耗材、細(xì)胞因子和細(xì)胞分離液、抗體和elisa試劑盒及常用生物試劑等,大量現(xiàn)貨火爆*,歡迎登錄www.ebioeasy.com或者,，洽談選購(gòu)！
| 說(shuō)明 : |
| 試劑盒組分： | Catalog# | PD1511-00 | PD1511-01 | PD1511-02 | | Preps | 2 | 10 | 25 | | ezBindTM Columns | 2 | 10 | 25 | | Buffer A1 | 22 mL | 110 mL | 270 mL | | Buffer B1 | 22 mL | 110 mL | 270 mL | | Buffer C1 | 27 mL | 135 mL | 330 mL | | RNase A （20 mg/mL） | 2.2 mg （110 µL） | 11 mg （550 µL） | 27 mg （1.35 µL） | | Elution Buffer | 6 mL | 30 mL | 60 mL | | User Manual | 1 | 1 | 1 | 保存條件： RNAse A在4℃下可以保存一年，Buffer A1加入RNase A 后4℃保存，其它組分室溫保存。 注意事項(xiàng)： - 質(zhì)?？截悢?shù)：純化中低拷貝的質(zhì)粒時(shí)，使用2倍的菌液體積，2倍的Buffer A1,B1,C1,100%乙醇，相同體積的Wash Buffer （70% 乙醇）和Elution Buffer。.
- 轉(zhuǎn)化菌：若為-70oC甘油凍存的菌，請(qǐng)先涂布平板培養(yǎng)后，再重新挑選新的單個(gè)菌落進(jìn)行培養(yǎng)。
- 柱結(jié)合能力：1 mg
操作簡(jiǎn)明步驟： - 取100 µL新鮮的菌液接種到150-200 mL （勿超過(guò) 200 mL）的LB培養(yǎng)基（含適量抗生素），37oC震蕩培養(yǎng)14-16小時(shí)。室溫下5,000 x g離心10分鐘，收集菌體，并盡可能的吸去上清。
- 加入10 mL Buffer A1（確保已加入RNase A），用移液器或渦流震蕩確保細(xì)菌沉淀重新懸浮。
- 加入 10 mL Buffer B1, 輕輕地反轉(zhuǎn)5-10 次以混合均勻，然后靜置2-5分鐘至溶液粘稠而澄清。
- 加入12 mL Buffer C1, 立即反轉(zhuǎn)5次，用手用力搖晃3-5次充分混勻，此時(shí)出現(xiàn)白色絮狀沉淀。
- 將離心管轉(zhuǎn)至高速離心機(jī)，在室溫下14,000 x g 離心10分鐘（若上清中有白色沉淀，可再次離心，）。
- 小心吸取離心后的上清液至15 mL管中（避免吸起沉淀），加入12 mL 100% 乙醇，立即搖勻，需馬上離心過(guò)DNA柱。
- 立即轉(zhuǎn)移20 mL裂解液/收集管至帶收集管的DNA柱中，室溫下> 2,500 x g 離心1分鐘，倒掉收集管中的廢液，將離心柱重新放回到收集管中。重復(fù)此步直至所有的溶液通過(guò)DNA柱。
- 向離心柱中加入10 mL 70% 乙醇，室溫下>2,500 x g 離心1分鐘，倒掉收集管中的廢液，將離心柱重新放回到收集管中。重復(fù)步驟“9”。
- 將離心柱放回高速離心機(jī)中，室溫下>2,500 x g 開蓋離心10分鐘，以*去除殘留的乙醇。
- 將離心柱轉(zhuǎn)至一個(gè)新的50 mL離心管中，向DNA柱膜的正中加入1-1.5 mL滅菌ddH2O（pH在7.0-8.5之間）或Elution Buffer，室溫放置1分鐘，5,000 x g離心5分鐘，以洗脫質(zhì)粒DNA。若想提高得率，將50 mL離心管中的洗脫液再加到柱的中間，5,000 x g離心5分鐘以洗脫質(zhì)粒DNA。
操作流程： |
