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北京西美杰科技有限公司
主營(yíng)產(chǎn)品： 生物學(xué)檢測(cè)試劑盒,化學(xué)試劑,蛋白質(zhì)氧化損傷,抗原抗體 |
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更新時(shí)間：2022-07-20 09:36:44瀏覽次數(shù)：499
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什么是支原體？
支原體是一種大小介于細(xì)菌和病毒之間(最小直徑 0.2μm)并獨(dú)立生活的微生物，沒有細(xì)胞壁，表面由胞質(zhì)膜構(gòu)成，約有 1%的支原體可通過濾菌器。支原體污染細(xì)胞后，培養(yǎng)液可不發(fā)生混濁，多數(shù)情況下細(xì)胞病理變化輕微或不顯著。細(xì)微變化也可由于傳代、換液而緩解，因此易被忽視。但個(gè)別嚴(yán)重者，可致細(xì)胞增殖緩慢，甚至從培養(yǎng)器皿脫落。支原體污染細(xì)胞后會(huì)影響下游試驗(yàn)結(jié)果。
為什么要重視細(xì)胞培養(yǎng)中的支原體污染？
1、污染率高：在細(xì)胞研究領(lǐng)域，支原體是臭名昭著的污染源，二十世紀(jì)九十年代的支原體污染率是四分之一，而目前有仍然有超過十分之一的基因表達(dá)研究（許多曾發(fā)表在頂尖雜志上），表現(xiàn)出支原體污染的跡象；
2、影響日趨嚴(yán)重：雖然支原體污染并不一定意味著研究結(jié)果無效，但它會(huì)影響數(shù)百個(gè)基因的表達(dá)，并與細(xì)胞競(jìng)爭(zhēng)營(yíng)養(yǎng)阻礙細(xì)胞的生長(zhǎng)。在目前測(cè)試的一組受污染的數(shù)據(jù)中（淋巴瘤細(xì)胞），已經(jīng)鑒定出 61 個(gè)被支原體改變的基因，干擾了實(shí)驗(yàn)結(jié)果。這無疑是對(duì)時(shí)間，資源，經(jīng)費(fèi)很大的浪費(fèi)；
3、難察覺：支原體污染*難以察覺的，污染后的細(xì)胞生長(zhǎng)速率一般并未發(fā)生顯著的影響，無法用肉眼識(shí)別，除非采用專門的支原體檢測(cè)方法檢測(cè)；
4、污染源多：“草率操作"、細(xì)胞系流通的交叉污染、操作人員自身都是很重要的污染源；
5、難去除：支原體體積小，無細(xì)胞壁，約有 1%的支原體可通過過濾器，且一般抗生素根本無法有效抑制或者去除支原體，另外，部分抗生素使用后會(huì)對(duì)細(xì)胞產(chǎn)生敏感效果，從而影響細(xì)胞的狀態(tài)；
6、重視程度日益增加：學(xué)術(shù)雜志發(fā)表實(shí)驗(yàn)結(jié)果需驗(yàn)證支原體污染影響，在國際上，支原體污染檢測(cè)已經(jīng)日益成為細(xì)胞培養(yǎng)污染常規(guī)檢測(cè)之一，同時(shí)也是有效規(guī)避支原體污染的重要方法之一。
世界性難題?。。?！Nature 収布癿文獻(xiàn)表明細(xì)胞研究領(lǐng)域中存在嚴(yán)重的支原體污染問題
Ewen Callaway. Contamination hits cell work. Nature, 29 July 2014; doi:10.1038/511518a
如何保護(hù)細(xì)胞細(xì)胞不受支原體的污染？
西美杰代理的德國PanReac Applichem 所提供Myco 系列支原體清除產(chǎn)品可以直接整合到質(zhì)膜上破壞支原體的完整性，從而有效地清除支原體污染，而且沒有細(xì)胞毒性。另有支原體檢測(cè)與預(yù)防系列產(chǎn)品可以給細(xì)胞提供更多的安全保護(hù)。
支原體污染檢清除/預(yù)防/檢測(cè)方案
一、AppliChem 支原體清除系列
對(duì)于普通細(xì)胞系，遭受污染以后可以通過重新復(fù)蘇，購買等途徑更換樣本，但是對(duì)于一些較難獲得的珍貴樣本，如干細(xì)胞，原代細(xì)胞，經(jīng)過特殊處理的，或訂購困難的細(xì)胞，一旦遭受支原體污染后，一定要馬上進(jìn)行處理。AppliChem研發(fā)的支原體清除的 Myco 系列產(chǎn)品，可以直接整合到質(zhì)膜上破壞支原體的完整性，從而有效的清除支原體污染，并可以針對(duì)不同程度，不同細(xì)胞樣本進(jìn)行針對(duì)性處理，處理過程簡(jiǎn)單，對(duì)細(xì)胞不會(huì)造成任何副作用。
名稱 | 主要成分 | 適用樣本 | 使用斱法 |
Myco-3 （貨號(hào) A5240） | 環(huán)丙沙星 | 貼壁細(xì)胞，可清除大多數(shù)支原體污染 | 100 倍稀釋加入培養(yǎng)基，每 2-3 天換液，連續(xù)處理14天 |
Myco-1 （貨號(hào) A5222） | 泰妙菌素 | 貼壁細(xì)胞，配合能解決頑固型支原體或者使用 Myco-3 處理停用后又出現(xiàn)支原體污染的情況 | 100 倍稀釋加入培養(yǎng)基，與 Myco-2 配合使用。使用 Myco-1 處理 4 天后換 Myco-2 處理 3 天，如此重復(fù) 2-3 次即可 |
Myco-2 （貨號(hào) A5233） | 二甲胺四環(huán)素 |
二、AppliChem 細(xì)胞污染預(yù)防系列
有效保護(hù)細(xì)胞的最好方式是對(duì)于細(xì)胞培養(yǎng)環(huán)境的預(yù)防，如工作環(huán)境定期消毒處理，嚴(yán)格實(shí)驗(yàn)操作，保證器皿無菌等各方面。在實(shí)驗(yàn)室中，CO2 培養(yǎng)箱，CO2 培養(yǎng)箱水盤，水浴鍋是非常重要的污染源。AppliChem 研發(fā)有系列污染預(yù)防系列產(chǎn)品專門針對(duì)這 3 大污染源，可有效預(yù)防真菌（及芽孢）、細(xì)菌、病毒等污染。使用方便，無腐蝕性，安全高效。
名稱 | 適用環(huán)境 | 預(yù)防微生物 | 使用斱法 |
Incubator-Clean （貨號(hào) A5230） | CO2 培養(yǎng)箱， 工作等臺(tái)等 | 支原體，真菌及芽孢、細(xì)菌、病毒（包拪 HIV，HBV 等） | 即用型，噴霧處理*濕潤(rùn)即可，無需轉(zhuǎn)移出細(xì)胞，建議每 2 周處理一次 |
Incuwater-Clean （貨號(hào) A5219） | C02 培養(yǎng)箱水盤 | 支原體，真菌及芽孢、細(xì)菌、病 毒（包拪 HIV，HBV 等） | 100 倍稀釋加入水盤滅菌水中，建議每 2-4 周更換滅菌水 |
Aquabator-Clean （貨號(hào) A9390） | 水浴鍋 | 細(xì)菌，真菌 | 100 倍稀釋加入水浴鍋，建議每 1-2 周吐水浴鍋加入一次，每 4-6 周給水浴鍋更換一次水 |
三、Applichem 支原體檢測(cè)系列
傳統(tǒng)的支原體檢測(cè)方法包括支原體分離培養(yǎng)、支原體特異酶檢測(cè)、DNA 熒光染色檢測(cè)以及 PCR 檢測(cè)，除 PCR 檢測(cè)方法以外，其他檢測(cè)方法大多耗時(shí)長(zhǎng)，要求檢測(cè)人員具有豐富的經(jīng)驗(yàn)，并且無法獲得足夠的靈敏度和特異性，對(duì)于一些稀有的支原體亞種無法有效檢測(cè)。
AppliChem 設(shè)計(jì)的支原體檢測(cè)試劑盒系列產(chǎn)品均是基于 PCR 方法，根據(jù)支原體 16S rRNA 保守序列設(shè)計(jì)引物，經(jīng)過 PCR 反應(yīng)擴(kuò)增其 16S rRNA 片段，后采用瓊脂糖電泳方法檢測(cè) 270bp 條帶。相對(duì)傳統(tǒng)方法而言，具有強(qiáng)大優(yōu)勢(shì)：
高靈敏度：敏感度高達(dá) 100~1000CFU/ml，僅需 要 0.5 - 1.0 ml 細(xì)胞上清樣本即可檢測(cè)；
檢測(cè)品種廣泛：可檢測(cè)常規(guī)品種，同時(shí)對(duì)于稀有 亞 種 也 能 同 效 檢 測(cè) ， 如 M. pneumoniae, Acholeplasma laidlawii, M. synoviae, M. pulmonis,M.bovis，幾乎覆蓋自然界 80 余個(gè)品種；
快速：操作時(shí)間只需 30 分鐘，全程 5 個(gè)小時(shí)內(nèi) 即可得到檢測(cè)結(jié)果；
可靠：試劑盒中包括有陽性對(duì)照 DNA，可保證 實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可重復(fù)性，減小因操作帶來的誤差；
安全性：無支原體培養(yǎng)過程，有效避免污染擴(kuò)大。
產(chǎn)品型號(hào) | 檢測(cè)方法 | 適用儀器 | 試劑盒組分 |
PCR Mycoplasma Test Kit （貨號(hào) A3744） | 普通 PCR-電泳檢測(cè) | 普通 PCR 儀器 | Reaction Mix Buffer Solution Positive Template Control |
qPCR Mycoplasma Test Kit （貨號(hào) A9019） | 熒光定量 PCR | LightCycler®1.2, 1.5, 2.0, 480, Rotor-Gene™ 3000, 6000, ABI Prism® 7000, iCycler iQ®, iQ™5, Opticon 2, Chromo 4, MX300P®, MX4000®. | Primer/Probe/Nucleotide Mix(RED) Rehydration Buffer(BLUE) Positive Control DNA(GREEN) Internal Control DNA(YELLOW) PCR Grade Water(WHITE) |
支原體污染檢清除/預(yù)防/檢測(cè)方案
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