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QQ交談MicBio-II酶標(biāo)板恒溫振蕩器在禽肉中氯霉素藥殘的快速檢測(cè)使用
點(diǎn)擊次數(shù)：5367 發(fā)布時(shí)間：2011-1-7
近年來，在對(duì)外出口畜禽食用產(chǎn)品時(shí)，對(duì)氯霉素殘留的檢測(cè)成為*的檢測(cè)指標(biāo)。國(guó)外一般要求畜禽食用產(chǎn)品中氯霉素不得超過1 ng／ml，這對(duì)檢測(cè)手段的靈敏度提出了很高的要求。目前我國(guó)國(guó)內(nèi)常用的檢測(cè)氯霉素藥殘的方法是使用液相法或氣相色譜法來對(duì)其進(jìn)行檢測(cè)，但這種檢測(cè)方法對(duì)樣品的處理比較復(fù)雜，對(duì)實(shí)驗(yàn)操作技術(shù)要求很高，不利于在基層生產(chǎn)單位推廣應(yīng)用。本實(shí)驗(yàn)根據(jù)酶聯(lián)免疫吸附（ELIsA）借助于氯霉素殘留快速檢測(cè)試劑盒對(duì)雞肉組織殘留的氯霉素進(jìn)行檢測(cè)，處理簡(jiǎn)單，操作步驟簡(jiǎn)便，可以快速有效地測(cè)定出肉品中的氯霉素殘留量，其對(duì)氯霉素檢測(cè)的靈敏度可以達(dá)到
0．03 ng／ml的水平。
1 材料
1．1 被檢樣品市場(chǎng)上隨機(jī)抽取的雞肉樣品，共92份。
1．2 快速檢測(cè)試劑盒購(gòu)自合肥艾本森科學(xué)儀器有限公司，美國(guó)Neogen公司生產(chǎn)，其組成為：（1）酶標(biāo)板，氯霉素抗體包被；（2）氯霉素標(biāo)準(zhǔn)溶液；（3）酶標(biāo)結(jié)合物；（4）酶標(biāo)結(jié)合物稀釋液；（5）底物溶液；（6）
反應(yīng)終止液；（7）標(biāo)樣／試樣稀釋液；（8）清洗液。以上各試劑4"C保存，使用時(shí)回升至室溫。MicBio-II酶標(biāo)板恒溫振蕩器，ABSON公司生產(chǎn)，
2 檢測(cè)方法
2．1 肉樣的處理方法（1）從被檢測(cè)的肉樣中取5 g樣品放入研缽中研磨成肉漿，用量筒量取20 ml PBS
緩沖液（pH7．2）倒入肉漿中，然后將其倒入5mI大離心管中。（2）將離心管在震蕩器上劇烈震蕩1 min，使PBS緩沖液充分發(fā)揮作用。（3）在15℃的條件下以3 000轉(zhuǎn)／min，離心15 min。（4）離心后取0．2 ml上
層液用0．2 ml標(biāo)樣／試樣稀釋液稀釋。
2．2 檢測(cè)程序按照1：100稀釋酶標(biāo)結(jié)合物。用移液管移取100 uL經(jīng)過稀釋的氯霉素標(biāo)準(zhǔn)液或樣品到相應(yīng)的微量滴定板孔中，每孔中再加入50uL經(jīng)過稀釋的酶標(biāo)結(jié)合物。蓋上塑料膜后，將酶標(biāo)板放入MicBio-II酶標(biāo)板恒溫振蕩器，溫育120 min。洗板3次：向每個(gè)孔中加入300uL清洗液，倒掉孔中的溶液，然后在紙巾上拍擊酶標(biāo)板，重復(fù)以上步驟3次（如果沖洗不*會(huì)影響檢測(cè)結(jié)果）。向反應(yīng)孔中加入100 uL底物溶液，進(jìn)行顯色反應(yīng)。讓反應(yīng)在室溫下暗處充分進(jìn)行30 min。到時(shí)間后向反應(yīng)孔中加入100uL 1 M 的硫酸（反應(yīng)終止液），顏色由蘭色變成黃色。充分混勻后，用酶標(biāo)儀在450 nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)吸光度（OD值）。顏色在30 min內(nèi)穩(wěn)定。
3 結(jié)果
根據(jù)酶標(biāo)儀測(cè)定數(shù)據(jù)，將各樣品吸光度與氯霉素標(biāo)準(zhǔn)溶液的吸光度對(duì)比，有20個(gè)樣品氯霉素含量在低
于0．5ng／g，有28個(gè)肉樣氯霉素含量在0．5～1．0ng／g之間，有l(wèi)8個(gè)肉樣氯霉素含量在1～5ng／g之間，有16個(gè)肉樣氯霉素含量在5～10ng／g之間有，7個(gè)肉樣氯霉素含量在10～50ng／g之間，有3個(gè)肉樣的氯霉素含量大于50ng／g，被檢92份雞肉樣品中47．83％的樣品氯霉素含量超標(biāo)（≥1 ng/g）。
4 討論
氯霉素是一種廣譜抗生索，具有較強(qiáng)的抗菌殺菌作用，由于價(jià)格比較便宜且治療效果比較明顯，過去在畜禽養(yǎng)殖中被廣泛應(yīng)用。但食品中氯霉素對(duì)人體的縫康會(huì)造成嚴(yán)重的影響，如再生障礙性貧血及粒狀細(xì)胞缺乏癥，新生兒、早產(chǎn)兒灰嬰綜合征等。因此，聯(lián)合國(guó)糧農(nóng)組織／世界衛(wèi)生組織食品添加劑專家委員會(huì)建議禁止此藥使用于食用動(dòng)物，美國(guó)、加拿大以及歐共體各國(guó)已嚴(yán)格控制將其用于食用動(dòng)物。由于歷史的原因，目前我國(guó)應(yīng)用含有氯霉素成分的藥物仍不在少數(shù)。為了維護(hù)人體健康，擴(kuò)大我國(guó)的肉制品外貿(mào)出口，*解決氯霉素在畜禽肉制品以及水產(chǎn)品中的殘留問題，除用藥、制定動(dòng)物的停藥期外，也需要加強(qiáng)檢測(cè)研究。肉類產(chǎn)品巾微生物檢測(cè)法，檢出氯霉素的zui低濃度為0．25～5．00 ng／ml。氣相或液相色譜的測(cè)定靈敏度雖能達(dá)到10 n g／ml，但其對(duì)樣品的處理比較復(fù)雜，對(duì)實(shí)驗(yàn)操作人員的要求很高，穩(wěn)定性與重復(fù)性均比較差，不利于在基層生產(chǎn)單位推廣應(yīng)用。應(yīng)用ELISA法檢測(cè)氯霉素殘留的靈敏度可達(dá)0．03 ng／ml的水平，是常規(guī)方法的數(shù)百倍，而且操作簡(jiǎn)便，檢測(cè)迅速。本方法不僅可用于各種肉制品中氯霉素殘留的檢測(cè)，而且可以用來檢測(cè)牛奶、蜂蜜、奶粉等，且結(jié)果穩(wěn)定，重復(fù)性好，值得推廣應(yīng)用。