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PCR基因擴(kuò)增儀使用的一些技術(shù)指導(dǎo)資料
閱讀：5006發(fā)布時(shí)間：2018-4-8
PCR基因擴(kuò)增儀現(xiàn)象是細(xì)胞發(fā)育到特定階段的需要，是細(xì)胞在給定時(shí)間內(nèi)大量擴(kuò)增基因序列、產(chǎn)生大量轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物的一種有效手段。在卵母細(xì)胞的成熟過(guò)程中，擴(kuò)增出大量的基因序列，用于基因轉(zhuǎn)錄，貯備大量的RNA轉(zhuǎn)錄本供受精后的早期使用，對(duì)于受精卵早期的蛋白質(zhì)合成及其生命活動(dòng)的正常執(zhí)行以及隨后的細(xì)胞分化和胚胎發(fā)育均具有極其重要的生物學(xué)意義。但擴(kuò)增出的大量基因序列僅在當(dāng)代作為膜板進(jìn)行轉(zhuǎn)錄用，不傳遞到下一代細(xì)胞。
PCR基因擴(kuò)增儀技術(shù)（PCR）聚合酶鏈反應(yīng)又稱無(wú)細(xì)胞分子克隆系統(tǒng)或特異性DNA序列體外引物定向酶促擴(kuò)增法，是基因擴(kuò)增技術(shù)的一次重大革新?？蓪O微量的靶DNA特異地?cái)U(kuò)增上百萬(wàn)倍，從而大大提高對(duì)DNA分子的分析和檢測(cè)能力，能檢測(cè)單分子DNA或?qū)γ?0萬(wàn)個(gè)細(xì)胞中僅含1個(gè)靶DNA分子的樣品，因而此方法立即在分子生物學(xué)、微生物學(xué)、醫(yī)學(xué)及遺傳學(xué)等多領(lǐng)域廣泛應(yīng)用和迅速發(fā)展。由于PCR具有敏感性高、特異性強(qiáng)、快速、簡(jiǎn)便等優(yōu)點(diǎn)，已在病原微生物學(xué)領(lǐng)域中顯示出巨大的應(yīng)用價(jià)值和廣闊的發(fā)展前景。
實(shí)驗(yàn)室工作導(dǎo)則
臨床PCR基因擴(kuò)增儀檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室的設(shè)計(jì)
?。ㄒ唬┡R床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室區(qū)域設(shè)計(jì)原則。原則上臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室應(yīng)當(dāng)設(shè)臵以下區(qū)域：試劑儲(chǔ)存和準(zhǔn)備區(qū)、標(biāo)本制備區(qū)、擴(kuò)增區(qū)、擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)。這4個(gè)區(qū)域在物理空間上必須是*相互獨(dú)立的，各區(qū)域無(wú)論是在空間上還是在使用中，應(yīng)當(dāng)始終處于*的分隔狀態(tài)，不能有空氣的直接相通。根據(jù)使用儀器的功能，區(qū)域可適當(dāng)合并。例如使用實(shí)時(shí)熒光PCR儀，擴(kuò)增區(qū)、擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)可合并；采用樣本處理、核酸提取及擴(kuò)增檢測(cè)為一體的自動(dòng)化分析儀，則標(biāo)本制備區(qū)、擴(kuò)增區(qū)、擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)可合并。各區(qū)的功能是：
1.試劑儲(chǔ)存和準(zhǔn)備區(qū)：貯存試劑的制備、試劑的分裝和擴(kuò)增反應(yīng)混合液的準(zhǔn)備，以及離心管、吸頭等消耗品的貯存和準(zhǔn)備。
2.標(biāo)本制備區(qū)：核酸（RNA、DNA）提取、貯存及其加入至擴(kuò)增反應(yīng)管。對(duì)于涉及臨床樣本的操作，應(yīng)符合生物安全二級(jí)實(shí)驗(yàn)室防護(hù)設(shè)備、個(gè)人防護(hù)和操作規(guī)范的要求。
3.擴(kuò)增區(qū)：cDNA合成、DNA擴(kuò)增及檢測(cè)。
4.擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)：擴(kuò)增片段的進(jìn)一步分析測(cè)定，如雜交、酶切電泳、變性液相分析、測(cè)序等。
?。ǘ┡R床PCR基因擴(kuò)增儀檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室的空氣流向。臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室的空氣流向可按照試劑儲(chǔ)存和準(zhǔn)備區(qū)→標(biāo)本制備區(qū)→擴(kuò)增區(qū)→擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)進(jìn)行，防止擴(kuò)增產(chǎn)物順空氣氣流進(jìn)入擴(kuò)增前的區(qū)域?？砂凑諒脑噭﹥?chǔ)存和準(zhǔn)備區(qū)→標(biāo)本制備區(qū)→擴(kuò)增區(qū)→擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)方向空氣壓力遞減的方式進(jìn)行?？赏ㄟ^(guò)安裝排風(fēng)扇、負(fù)壓排風(fēng)裝臵或其他可行的方式實(shí)現(xiàn)。
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