根據(jù)《中國藥典》2020版三部生物制品生產(chǎn)檢定用動物細胞基質(zhì)制備及質(zhì)量控制，用于生產(chǎn)抗體類藥物、蛋白類藥物、細胞治療產(chǎn)品等生物制品的細胞系/株，需通過全面的細胞檢定，并經(jīng)國家藥品監(jiān)督管理部門批準。義翹神州細胞庫檢測實驗室為生物安全二級實驗室，已在北京市備案，且通過CNAS認證。該實驗室按照GMP和GLP質(zhì)量體系運行，B+A環(huán)境，滿足無菌檢測、分枝桿菌檢測環(huán)境要求。

義翹神州擁有經(jīng)驗豐富的檢測團隊，可全程提供技術指導，并在項目開展之前提供相關咨詢。依據(jù)藥典方法及ICH、FDA及其它監(jiān)管法規(guī)，義翹神州可根據(jù)客戶的不同申報需求，提供細胞庫檢定方案，以更好地幫助客戶完成中外申報，滿足出海需求。出具的檢測報告獲得監(jiān)管部門認可，已助力多家公司完成IND和BLA申報。

細胞庫的建立

細胞庫的建立可為生物制品的生產(chǎn)提供檢定合格、質(zhì)量相同、能持續(xù)穩(wěn)定傳代的細胞。 

各級細胞庫的概念

• PCB：由一個原始細胞群體發(fā)展成為傳代穩(wěn)定的細胞群體，或經(jīng)過克隆培養(yǎng)形成的均一細胞群體，通過檢定證明適用于生物制品生產(chǎn)或檢定。在特定條件下，將一定數(shù)量、成分均一的細胞懸液，定量均勻分裝于細胞凍存管，于液氮凍存，即為細胞種子，供建立主細胞庫用。 

• WCB：工作細胞庫的細胞由MCB傳代擴增制成。生產(chǎn)企業(yè)的工作細胞庫必須限定為一個細胞代次。凍存時細胞的傳代水平須確保細胞復蘇后傳代增殖的細胞數(shù)量能滿足生產(chǎn)一批或一個亞批制品。復蘇后的傳代的水平應不超過批準的該細胞用于生產(chǎn)的限定。所制備的WCB必須經(jīng)檢定合格后，方可用于生產(chǎn)。 

• MCB：取細胞種子經(jīng)細胞傳代、增殖后均勻混合成一批，定量均勻分裝于細胞凍存管，保存于液氮。經(jīng)全面檢定合格后，即可作為主細胞庫，用于工作細胞庫的制備。生產(chǎn)企業(yè)的主細胞庫最多不得超過兩個細胞代次。 

• EOPC&UPB：生產(chǎn)終末細胞是指在或超過生產(chǎn)末期時收獲的細胞，盡可能取按生產(chǎn)規(guī)模制備的生產(chǎn)末期細胞。EOPC應進行一次全面檢定，當生產(chǎn)工藝發(fā)生改變時，應重新對EOPC進行檢測。收獲液UPB包含生產(chǎn)用細胞和細胞培養(yǎng)上清液。 

細胞庫檢定的必要性

生物制品的安全性：造成生物制品的污染，直接影響產(chǎn)品的安全性； 污染后給企業(yè)帶來巨大的經(jīng)濟損失。 

國內(nèi)外法規(guī)要求：中國、美國、歐洲等藥典明確規(guī)定必須對細胞庫進行充分檢定后才可用于生物制品的生產(chǎn)； CDE審查必查項目。 

細胞庫檢定階段

原則上各級細胞庫建好庫后要及時進行檢定，確保細胞庫沒有污染后，才能用于下級細胞庫的建立或產(chǎn)品的生產(chǎn)。  細胞庫建立后應至少對MCB細胞及生產(chǎn)終末細胞（EOPC）進行一次全面檢定。當生產(chǎn)工藝發(fā)生改變時，應重新對EOPC進行檢定。每次從MCB建立一個新的WCB，均應按規(guī)定項目進行檢定。 IND或BLA階段對細胞庫的檢定要求是相同的，但需滿足現(xiàn)行藥典法規(guī)的要求。

雙C認證細胞庫檢測服務  

○ 經(jīng)驗豐富，方法成熟                 ○ 檢測快，通量高，周期短                ○ 支持中外雙報，滿足出海需求

雙C認證細胞庫檢測服務技術平臺

蘇州細胞庫檢測中心

蘇州細胞庫檢測中心是一個專門提供細胞庫檢定服務的檢測中心，占地面積廣，通量大，可以解決更多客戶需求。同時實驗室嚴格遵循GLP和GMP規(guī)范進行管理。
• 體系認證：CMA認證、CNAS (申請中)
• 管理：GMP、GLP、CNAS
• 實驗室：生物二級+負壓條件

北京細胞庫檢測中心

擁有專業(yè)的細胞庫檢測技術人員，實踐經(jīng)驗豐富，可根據(jù)不同生物制品類別和國內(nèi)外（如NMPA、FDA、ICH、EMA等）不同的申報要求，制定規(guī)范科學和經(jīng)驗證的細胞庫檢定方案。
• 體系認證：CNAS認證
• 管理：GMP、GLP、CNAS
• 實驗室：生物二級+負壓條件

實驗室和儀器設備

實驗室按照GLP和GMP質(zhì)量體系運行，B+A環(huán)境，符合無菌檢測、分枝桿菌檢測環(huán)境要求。并通過生物安全二級實驗室備案，保證生物安全。配套共聚焦顯微鏡、透射電鏡、熒光定量PCR儀等儀器設備。

細胞庫檢測服務范圍

義翹神州可提供主細胞庫（MCB）、工作細胞庫（WCB）、收獲液 (UPB)、生產(chǎn)終末細胞（EOPC）的細胞庫檢定服務，已成功檢測多個CHO、293、間充質(zhì)干細胞等細胞庫項目。細胞庫檢測方法成熟，符合藥典等法規(guī)的要求，且經(jīng)過嚴格的方法學驗證。

細胞庫檢測服務內(nèi)容

義翹神州遵循NMPA、FDA、EMA、ICH等多個國內(nèi)外法規(guī)和指導原則，建立了全面的細胞庫檢定方法，主要包括以下幾個方面：細胞鑒別、無菌檢查、支原體檢查、內(nèi)外源病毒污染檢查、成瘤性檢查等，義翹神州提供的檢測項目和方法描述見下表：

備注："+" 為必檢項目，"-" 為非強制檢定項目。(+) 表示需要根據(jù)細胞特性、傳代歷史、培養(yǎng)過程等情況要求的檢定項目。

細胞庫檢定方法

• 細菌、真菌檢查
  無菌檢查
  按照2020版《中國藥典》三部通則1101無菌檢查法的要求進行，義翹神州可提供薄膜過濾法和直接接種法。無菌檢查在B+A環(huán)境中進行，并且在檢測過程中對環(huán)境進行持續(xù)監(jiān)測。下圖是采用薄膜過濾法的案例。

• 支原體檢查——培養(yǎng)法
  按照2020版《中國藥典》中生物制品生產(chǎn)檢定用動物細胞基質(zhì)制備及質(zhì)量控制及通則3301支原體檢查法的要求進行，義翹神州提供符合法規(guī)要求的支原體檢查（培養(yǎng)法）。培養(yǎng)法檢測的靈敏度高于中國藥典要求，肺炎支原體達到10-9，口腔支原體達到10-5。

• 支原體檢查——DNA染色法
  按照2020版《中國藥典》中生物制品生產(chǎn)檢定用動物細胞基質(zhì)制備及質(zhì)量控制及通則3301支原體檢查法的要求進行，義翹神州提供符合法規(guī)要求的指示細胞培養(yǎng)法（DNA 染色法）。如果樣品被支原體污染，在熒光顯微鏡下除細胞外，可見大小不等、不規(guī)則的熒光著色顆粒。

• 內(nèi)外源病毒污染檢查——體外不同指示細胞接種培養(yǎng)
  按照2020版《中國藥典》中生物制品生產(chǎn)檢定用動物細胞基質(zhì)制備及質(zhì)量控制的要求進行，根據(jù)樣品需求提供周期為14或28天（人或猴巨細胞病毒，CMV）的檢測。將供試品接種至3種指示細胞（Vero、MRC-5、同種屬同組織類型來源細胞），連續(xù)培養(yǎng)14天或28天，觀察細胞病變，并采用血吸附和血凝集檢測是否存在任何病毒污染。

• 內(nèi)外源病毒污染檢查——牛源病毒檢查
  按照2020版《中國藥典》中生物制品生產(chǎn)檢定用動物細胞基質(zhì)制備及質(zhì)量控制及通則3604新生牛血清檢測要求的要求進行。通過接種指示細胞培養(yǎng)21天，分別進行細胞病變觀察（CPE）、血吸附檢查（HAd）及熒光抗體檢測（IF）。牛源性病毒檢查按照中國藥典要求，提供完整的陽性對照和陰性對照。

• 內(nèi)外源病毒污染檢查——豬源病毒檢查
  按照2020版《中國藥典》中生物制品生產(chǎn)檢定用動物細胞基質(zhì)制備及質(zhì)量控制的要求進行，通過接種指示細胞PK-15培養(yǎng)21天后進行細胞病變觀察（CPE）、血吸附檢查（HAd）。

• 內(nèi)外源病毒污染檢查——動物和雞胚體內(nèi)接種法
  按照2020版《中國藥典》中生物制品生產(chǎn)檢定用動物細胞基質(zhì)制備及質(zhì)量控制及通則3302外源病毒因子檢查法的要求進行，義翹神州提供乳鼠腦內(nèi)及腹腔接種法、小鼠腦內(nèi)及腹腔接種法、豚鼠腹腔接種法、家兔皮內(nèi)及皮下接種法、雞胚接種法。