NF-KB p65活性檢測實(shí)驗(yàn)
| 參考價(jià) | ￥ 200 |
| 訂貨量 | ≥1 只 |
- 公司名稱 上海研謹(jǐn)生物科技有限公司
- 品牌 其他品牌
- 型號
- 產(chǎn)地
- 廠商性質(zhì) 經(jīng)銷商
- 更新時(shí)間 2020/3/17 15:50:17
- 訪問次數(shù) 2352
聯(lián)系方式：楊小姐13585717991 查看聯(lián)系方式
聯(lián)系我們時(shí)請說明是化工儀器網(wǎng)上看到的信息，謝謝!
公司主營： 各種實(shí)驗(yàn)代做：WB代做，免疫組化，PCR代做，細(xì)胞檢測，食品安全檢測試劑，獸藥殘留檢測試劑，動物疫病類檢測，銷售高品質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)品，對照品，ELISA試劑盒，細(xì)胞，血清，等等
| 應(yīng)用領(lǐng)域 | 醫(yī)療衛(wèi)生,生物產(chǎn)業(yè) |
|---|
NF-KB p65活性檢測實(shí)驗(yàn)
核轉(zhuǎn)錄因子NF-kappaB (NF-kB) 是一種重要的轉(zhuǎn)錄因子，參與調(diào)控多種與炎癥、抗凋亡、
腫瘤形成和轉(zhuǎn)化有關(guān)的基因表達(dá)。NF- kappaB (NF _kB)初被鑒定為在B細(xì)胞中和免疫球蛋白k輕鏈的增強(qiáng)子結(jié)合。但隨后在非B-細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)中被發(fā)現(xiàn)，形成NF-KB和kB的復(fù)合物。初在DNA結(jié)合蛋白復(fù)臺物中分離的NF -kB是由p65(ReIA)和p50構(gòu)成的異源雙聚體。其他分離的單體包括p49 (也可稱為p52) , p75 (C-Rel) ,p68(ReIB)。 p65,p68，p75單體起反式激活作用。p50, p49 (p52) 單體具有DNA結(jié)合活力，但只具有微量的反式激活作用。據(jù)報(bào)道p49和NF-kB的單體p65形成具有轉(zhuǎn)錄活力的異源雙體，類似于p50/ p65異源雙體。p49/ p65和p50/ p65異源雙體在細(xì)胞質(zhì)中受一種叫kBa/MAD-3的抑制劑調(diào)節(jié)。
IkB和p65單體結(jié)合，阻制了細(xì)胞核中的定位和DNA的結(jié)合。在體外高濃度的p65能形成同源雙聚體，能和DNA微弱地結(jié)合。Poly(dl:dC)能抑制這一 反應(yīng) 。p49和p50也能形 成同源雙聚體，但在細(xì)胞中的濃度很低。通常,在作NF-KB的凝膠遷移實(shí)驗(yàn)時(shí),在20ul的反應(yīng)體積中，有溶于10 mM HEPES的0.28pmoles的NF -kB9寡核苷酸(pH7.9), 50mMKCI, 0.2mMEDTA, 2.5mM DTT, 10%甘油，0.05%NP-40。當(dāng)用純化的蛋白時(shí)，250-300ng足以形成凝膠遷移復(fù)合物， 而需用10ug的Hel a細(xì)胞核抽提物。凝膠遷移復(fù)合物在室溫中保溫30分鐘，在50mMTris(pH8 3)和38mM甘氨酸的7%聚丙烯酰胺凝膠電泳中分離凝膠遷移復(fù)合物。含考馬斯蘭和二甲苯藍(lán)色素的加樣溶液只能加入到陰性對照反應(yīng)中，因這兩種色素會加劇NF-kB復(fù)合物的解離。當(dāng)用Hel a細(xì)胞核抽提物作為結(jié)合蛋白來源時(shí)，可形成兩種序列特異的凝膠遷移復(fù)合物，即p50/p50同源雙聚體和p50/ p65異源雙聚體。在表達(dá)p49，p50, p65的細(xì)胞中， 可檢測到4個(gè)序例特異的凝膠遷移復(fù)合物(p49/ p49，p50/ p50，p50/ p65，p49/ p65)，如果存在高濃度的p65，可檢測到微量的p65/p65.
下列試劑可加強(qiáng)NF- kB在體外的結(jié)合: mM的GTP, ATP, 精胺，亞精胺,鋇或鈣離子，ng的
Co+3(NH3)6 (12) 。提取組織或細(xì)胞核蛋白，利用不同形式的NF -Kb p65抗體捕獲細(xì)胞核蛋白并加以區(qū)分,通過酶標(biāo)儀450nm處測定核蛋白標(biāo)準(zhǔn)品與NF -Kb p65吸光度值，進(jìn)行定量比較,從而明確目的蛋白的活化度。
實(shí)驗(yàn)代做服務(wù)：
| |||
| |||
| |||
| |||
采購中心
化工儀器網(wǎng)