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        1. 上海易佰聚經貿有限公司
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          質粒中量提取試劑盒

          時間:2013-1-5閱讀:911
          分享:

          英文名稱:Plasmid Midiprep Kit I  

          中文名稱 :質粒中量提取試劑盒

          編號:PD1411-01

          規(guī)格: 10 次

          品牌:biomiga

           

          佰易聚生物商城提供的分子生物學試劑和試劑盒、美國聯(lián)合碳化和美國光譜醫(yī)學透析袋、培養(yǎng)基和培養(yǎng)耗材、細胞因子和細胞分離液、抗體和elisa試劑盒及常用生物試劑等,大量現(xiàn)貨火爆*,歡迎登錄www.ebioeasy.com或者,,洽談選購!

          說明 :

          15~50 mL 細菌培養(yǎng)液中純化200 μg

          試劑盒組分:
           
          Catalog
          PD1411-01
          Preps
          10
          ezBindTM Columns
          10
          Buffer A1
          30 mL
          Buffer B1
          30 mL
          Buffer C1
          35 mL
          Buffer KB
          35 mL
          RNase A (20 mg/mL)
          3 mg (150 µL)
          Elution Buffer
          25 mL
          User Manual
          1
           
          保存條件:
           
          RNAse A在4℃下可以保存一年,Buffer A1加入RNase A 后4℃保存,其它組分室溫保存。
           
          注意事項:
          1. 質??截悢担杭兓械涂截惖馁|粒時,使用2倍的菌液體積,2倍的Buffer A1,B1,C1,100%乙醇,相同體積的Wash Buffer (70% 乙醇)和Elution Buffer.
          2. 轉化菌:若為-70oC甘油凍存的菌,請先涂布平板培養(yǎng)后,再重新挑選新的單個菌落進行培養(yǎng)。切勿直接取凍存在4oC的菌進行培養(yǎng)。
          3. 柱結合能力:250 μg
          操作步驟:
          1. 培養(yǎng)14-16小時。室溫下5,000 x g離心10分鐘,收集菌體,并盡可能的吸去上清。
          2. 加入2.5 mL Buffer A1(確保已加入RNase A),用移液器或渦流震蕩確保細菌沉淀重新懸浮。
          3. 加入 2.5 mL Buffer B1, 輕輕地反轉5-10 次以混合均勻,然后靜置2-5分鐘至溶液粘稠而澄清。 
          4. 加入3.0 mL Buffer C1, 立即反轉5次,用手用力搖晃3-5次充分混勻,此時出現(xiàn)白色絮狀沉淀。
          5. 將離心管轉至高速離心機,在室溫下14,000 x g 離心10分鐘(若上清中有白色沉淀,可再次離心)。
          6. 小心吸取離心后的上清液至15 mL管中(避免吸起沉淀),加入3.0 mL 100% 乙醇,立即搖勻,需馬上離心過DNA柱。
          7. 立即轉移6.0 mL裂解液/收集管至帶收集管的DNA柱中,室溫下> 2,500 x g 離心1分鐘,倒掉收集管中的廢液,將離心柱重新放回到收集管中。重復此步直至所有的溶液通過DNA柱。
          8. 可選: 向DNA柱中加入 3.0 mL Buffer KB, 室溫下> 2,500 x g 離心1分鐘,倒掉收集管中的廢液,將離心柱重新放回到收集管中。
          9. 向離心柱中加入4.0 mL 70% 乙醇,室溫下>2,500 x g 離心1分鐘,倒掉收集管中的廢液,將離心柱重新放回到收集管中。重復步驟“9”。
          10. 將離心柱放回高速離心機中,室溫下>2,500 x g 開蓋離心10分鐘,以*去除殘留的乙醇。
          11. 將離心柱轉至一個新的15 mL離心管中,向DNA柱膜的正中加入0.5 mL滅菌ddH2O(pH在7.0-8.5之間)或Elution Buffer,室溫放置1分鐘,>2,500 x g離心5分鐘,以洗脫質粒DNA。若想提高得率,將15 mL離心管中的洗脫液再加到柱的中間,>2,500 x g離心5分鐘以洗脫質粒DNA。

          操作流程:

                    

           

           

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