exosome如今是個熱門的話題。這種直徑約為30-150 nm的小囊泡天然存在于所有體液中,包括血液、唾液、尿液和母乳,且其蛋白、RNA和脂肪成分特異,因此,exosome有望在多種疾病的早期診斷中發(fā)揮作用。如何開展exosome的研究?我想這是大家都感興趣的。那就讓我們來看看的梅約診所(Mayo Clinic)是怎樣做的。
exosome如今是個熱門的話題。這種直徑約為30-150 nm的小囊泡天然存在于所有體液中,包括血液、唾液、尿液和母乳,且其蛋白、RNA和脂肪成分特異,因此,exosome有望在多種疾病的早期診斷中發(fā)揮作用。如何開展exosome的研究?我想這是大家都感興趣的。那就讓我們來看看的梅約診所(Mayo Clinic)是怎樣做的。
梅約診所的Gregory Gores博士主要開展肝臟疾病的基礎研究。他所感興趣的領域之一是脂毒性及其在非酒精性脂肪性肝病發(fā)展中的作用。研究小組提出假說,認為脂毒性誘導肝臟細胞釋放囊泡(exosome和小囊泡)。他們推測,這些細胞外囊泡參與了免疫細胞的招募和激活,導致肝臟炎癥。
Gores博士的小組需要測定樣品中細胞外囊泡的大小分布和數(shù)量。之前,他們使用掃描電鏡來觀察和測定顆粒大小,并通過吸光度來測定蛋白含量,但發(fā)現(xiàn)這種方法不大準確。于是,他們選擇了NanoSight的納米顆粒追蹤分析(NTA)技術。有了這一技術,他們能夠在分離后立即分析囊泡,并在同一天內將濃度的囊泡用于后續(xù)實驗。
在實驗過程中,他們使用的是NS300納米顆粒分析儀。此款儀器能夠測定大小在10-2000 nm的懸浮顆粒,滿足廣泛的應用需求,包括蛋白聚集、exosome和囊泡研究、藥物運輸,也特別適合以熒光量子點標記的顆粒分析。
這個款的NanoSight儀器提供了多方面的分析。它配備一個能同時放置六塊熒光濾片的機動濾光輪,并具有流變特征,可測定在0-5 cP范圍內的粘度。它還配有高靈敏度的CMOS攝像頭、溫度控制,以及激光塊的選擇。它外形小巧,占地僅為40 cm長和25 cm寬,適合那些空間有限的實驗室。
在談及NS300納米顆粒分析儀時,研究員Petra Hirsova博士談道:“能夠實時地看到、計數(shù)并測定顆粒的大小,這相對于我們使用過的其他技術已經是很大的優(yōu)勢。與掃描電鏡相比,NTA制備樣品和獲得結果要更輕松、更快速。與測定囊泡總蛋白的技術相比,NTA帶來了細胞外囊泡的更評估。”
NanoSight是一家私營公司,總部設在英國。它已在范圍內出售了500多臺儀器,其客戶包括葛蘭素史克、諾華、輝瑞、寶潔、聯(lián)合利華等,以及zui的大學和研究所。截至目前,NanoSight的技術已被900多篇第三方文獻引用。在今年9月,NanoSight被思百吉集團所收購。
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