一、范圍：本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了片劑脆碎度檢查方法和操作要求。

          適用于本公司片劑（非包衣片）脆碎度檢查。

二、引用標(biāo)準(zhǔn)：中華人民共和國藥典（2000年版二部附錄）

三、質(zhì)量指標(biāo)

四、儀器與用具

1、脆碎儀：（內(nèi)徑約為286mm，深度為39mm，內(nèi)壁拋光，一邊可打開的透明耐磨塑料圓筒，筒內(nèi)有一自中心向外壁延伸的弧形隔片（內(nèi)徑為80mm+1mm），使圓筒轉(zhuǎn)動(dòng)時(shí)，片劑產(chǎn)生滾動(dòng)。圓筒直立固定于水平轉(zhuǎn)軸上，轉(zhuǎn)軸與電動(dòng)機(jī)相連，轉(zhuǎn)速為每分鐘25轉(zhuǎn)+1轉(zhuǎn)。每轉(zhuǎn)動(dòng)一圈，片劑滾動(dòng)或滑動(dòng)至筒壁或其他片劑上。

2、萬分之一天平

3、稱量瓶（扁表：Φ50×30）

4、吹風(fēng)機(jī)

5、鑷子：紗手套

六、操作方法：

1、片重為0.65g或以下者取若干片，使其總重約為6.5g，片重大于0.65g者取10片。用吹風(fēng)機(jī)吹去脫落的粉末，精密稱重，置圓筒中，轉(zhuǎn)動(dòng)100次。取出，同法除去粉末，精密稱重，減失重量不得過1%，且不得檢出斷裂，龜裂及粉碎的片。本試驗(yàn)一般僅作1次。如減失重量超過1%時(shí)，可復(fù)檢2次，3次的平均減失重量不得過1%，并不得檢出斷裂、龜裂及粉碎的片。

2、如供式品的形狀或大小使片劑在圓筒中形成不規(guī)則滾動(dòng)時(shí)，可調(diào)節(jié)筒的底座，使與桌面成約10⁰的角，試驗(yàn)時(shí)片劑不再聚集，能順利下落。

3、對(duì)泡騰片及口嚼片等易吸水的制劑，操作時(shí)應(yīng)注意防止吸濕（通?？刂葡嘁詽穸刃∮?0%）。

微生物限度檢查操作規(guī)程

一、范圍：本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了微生物限度檢查方法和操作要求；

          本標(biāo)準(zhǔn)適應(yīng)于藥品微生物限度的檢查。

二、引用標(biāo)準(zhǔn)：中國藥典2000年版二部。

三、 微生物限度標(biāo)準(zhǔn)：

注：活螨不得檢出。

四、藥品微生物限度檢查法總則

1、抽樣

1.1  供試品一般按批號(hào)隨機(jī)抽樣。

1.2  抽樣量一般檢驗(yàn)用量（2個(gè)以上zui小包裝單位）的3倍量。

1.3  抽樣時(shí)，凡發(fā)現(xiàn)有異?？梢傻臉悠?，應(yīng)缺陷選有疑問的樣品，但因機(jī)械損傷明顯破裂的包裝不得作為樣品，凡已能從藥品、瓶口（外蓋內(nèi)側(cè)及瓶口周圍）外觀看出長螨、長霉、蟲蛀及變質(zhì)的藥品，可直接判為不合格，無需要再抽樣檢驗(yàn)。

2、供試品保存

2.2  供試品在檢驗(yàn)之前，應(yīng)該保持原有包裝狀態(tài)，嚴(yán)禁開啟，包裝已開啟的樣品不得作為供試品。

3、檢驗(yàn)

3.1  供試品檢驗(yàn)項(xiàng)目按《中國藥典2000年版二部》微生物限度標(biāo)準(zhǔn)（附錄XI J）確定。

3.2 檢驗(yàn)的全過程，均應(yīng)嚴(yán)格遵守?zé)o菌操作，嚴(yán)防再污染。

3.3 除另有規(guī)定外，供試品制備成供試液后，應(yīng)在均勻狀態(tài)取樣。

3.4 制成供試液后，應(yīng)該在60分鐘內(nèi)注皿操作完畢。

4、培養(yǎng)

4.1  除另有規(guī)定外，本檢查法中細(xì)菌培養(yǎng)溫度為30~35℃，霉菌、酵母菌培養(yǎng)溫度為25~28℃，控制菌培養(yǎng)溫度為36℃±1℃。

5、復(fù)檢

5.1  菌數(shù)測(cè)定不合格者應(yīng)復(fù)檢，控制菌檢查以一次檢出為準(zhǔn)，不再復(fù)試，但應(yīng)保留檢出菌株一個(gè)月備查。

5.2  復(fù)試項(xiàng)目以下不合格項(xiàng)目為準(zhǔn)，作單項(xiàng)復(fù)試。

5.3  復(fù)試需另取同批號(hào)樣品，測(cè)定2次。

5.4  復(fù)試報(bào)告，以3次測(cè)定結(jié)果的算術(shù)平均值報(bào)告。

6、檢驗(yàn)報(bào)告

6.1  檢驗(yàn)報(bào)告以1g、1ml或10cm²為單位。

6.2  測(cè)定菌數(shù)報(bào)告，以每次測(cè)定結(jié)果全部平均值報(bào)告。

6.3  控制菌按檢驗(yàn)結(jié)果報(bào)告，如未檢出控制菌時(shí)，報(bào)告為“按規(guī)定抽樣檢驗(yàn)結(jié)果卡檢出××菌”，如抽樣中任意一樣品檢出控制菌時(shí)，報(bào)告為“按規(guī)定抽樣，檢出××菌，不符合藥品微生物限度標(biāo)準(zhǔn)”。

五、培養(yǎng)基及其制備方法

1、營養(yǎng)瓊脂培狀態(tài)養(yǎng)基

取營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基34g，加1000ml蒸餾水，加熱溶解，分裝，116℃高壓滅菌20分鐘。

2、玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基（虎紅瓊脂培養(yǎng)基）。

取玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基30g，加1000ml蒸餾水，加熱溶解，分裝，116℃高壓滅菌20分鐘。

3、膽鹽乳糖培養(yǎng)基（BL）

十二、檢查法：

1、檢查前的準(zhǔn)備：

1.1 用具的洗滌與滅菌。

1.1.1 試管：使用過的試管經(jīng)消毒后，將培養(yǎng)基倒出，用清潔液洗刷，用水沖洗4-5次，倒立，晾干備用。滅菌前，用棉塞塞上管口，牛皮紙包緊，扎緊。

1.1.2 吸管：使用過的吸管用清潔液浸泡數(shù)分鐘后，用水沖洗4-5次，晾干，備用。滅菌前，在吸管上端距0.5cm處塞入約2cm左右的適當(dāng)疏松棉花，用牛皮紙裹緊。

1.1.3 研缽：使用過的研缽用清潔液洗刷后，用水沖洗數(shù)次，晾干備用。滅菌前，用牛皮紙將缽體和錘包裹。

1.1.4 培養(yǎng)皿：使用過的培養(yǎng)皿經(jīng)消毒后，將培養(yǎng)基倒出，用清潔液洗刷，用水沖洗4-5次，倒立、晾干備用。滅菌前，根據(jù)消毒器內(nèi)經(jīng)大小用牛皮紙包數(shù)個(gè)培養(yǎng)皿，扎緊。

1.1.5 將上述包好的用具，放在121的高壓蒸汽消毒器中，滅菌30min后，放入微生物限度檢查室定點(diǎn)位置，備用。

1.2  將所有已滅菌的培養(yǎng)皿、三角瓶、吸管（1ml、10ml）、稀釋劑及供試品等移至無菌室內(nèi)。每次試驗(yàn)所用物品必須事先計(jì)劃，準(zhǔn)備足夠用量，避免操作中出入操作間。將全部包裝（牛皮紙）去掉，編號(hào)。

1.3  開啟無菌室紫外線殺菌燈和空氣過濾裝置并使用其工作30min。

1.4 操作人員用肥皂洗手，關(guān)閉紫外線殺菌燈，進(jìn)入緩沖間，換工作鞋，再用0.1%新潔爾滅或用75%乙醇棉球擦手，待干后，穿戴無菌衣、帽、口罩。

1.5 操作前先用75%乙醇棉球擦手，并擦拭供試品瓶、盒、袋等的開口周圍，待干后將供試品瓶、盒、袋啟封，啟封后先檢查瓶蓋內(nèi)側(cè)及瓶口周圍有無生霉、長螨的跡象，對(duì)肉眼可見疑似者，若經(jīng)證實(shí)為生霉、長螨即可判定為不合格，無須繼續(xù)檢驗(yàn)。

2、細(xì)菌、霉菌、酵母菌計(jì)數(shù)。

2.1 檢驗(yàn)程序：

                                      干燥

2.2 操作步驟：

2.2.1  供試液制備：經(jīng)陰性對(duì)照取樣后，按各類制劑制備供試液的方法（見10供試液的制備）制備。

2.2.2  稀釋及取樣

稀釋：取1ml 吸管1支，吸取混勻的1:10供試液（或原液，1:20供試液）1ml，在離稀釋劑液面上約1cm處，測(cè)管壁注入裝有9ml的稀釋劑的的試管中，混勻成1:100 (或1:10，1:200)的稀釋液。

吸樣：用上述吸管分別取1:10供試液（或原液，1:20供試液）1ml，注入2~3個(gè)平皿中，以另一支1ml吸管，按上述操作下一級(jí)的稀釋與吸取。

2.2.3 注皿與干燥

事先將培養(yǎng)融化，置45℃水浴中，備用，當(dāng)供試液及各稀釋液均注入平皿后，以上述培養(yǎng)基傾注入平皿，每平皿約15ml，轉(zhuǎn)動(dòng)平皿，使樣液與培養(yǎng)基混勻后，置水平臺(tái)上待凝。培養(yǎng)基凝固后，在凈化條件下開蓋倒置或換滅菌的陶瓦蓋，使平板干燥，減少平板表面的水分，防止菌落蔓延生長，干燥時(shí)間一般在3h左右，干燥時(shí)間計(jì)入培養(yǎng)時(shí)限。

2.2.4 培養(yǎng)：將上述平板倒置于適宜溫度的培養(yǎng)箱中，培養(yǎng)。細(xì)菌于30~35℃培養(yǎng)48±2小時(shí)，霉菌于25~28℃培養(yǎng)72±2小時(shí)。

2.3 菌落計(jì)數(shù)：

2.3.1 用肉眼直接計(jì)數(shù)，標(biāo)記或在菌落計(jì)數(shù)器上點(diǎn)計(jì)，然后用5-10倍放大鏡檢查，是否遺漏。

2.3.2 若平板上有2個(gè)或2個(gè)以上的菌落重疊，可分辨時(shí)辨，仍以1個(gè)或2個(gè)以上菌落計(jì)數(shù)。

2.3.3 平板上有片狀菌落或花斑樣菌落蔓延生長以及平板受到污染的情況，該平板計(jì)數(shù)無效。

2.3.4 當(dāng)同一稀釋級(jí)使用2個(gè)平板時(shí)，應(yīng)采用2個(gè)平板菌落數(shù)的均值為平均平板菌落數(shù)，若2個(gè)平板菌落數(shù)相差在1倍以上時(shí)，該稀釋級(jí)不宜采用，但不包括2個(gè)平板菌數(shù)均在15個(gè)以下的情況（15個(gè)以下兩平板菌落數(shù)允許幅度0-4，1-7，2-9，4-12，5-14，6-15，7-17，8-18，9-19，10-20）。

2.3.5 當(dāng)同一稀釋級(jí)使用3個(gè)平板時(shí)，應(yīng)采用3個(gè)平板菌落數(shù)的均值為平均平板菌落數(shù)，若其中1個(gè)平板菌落數(shù)不能參與平均，但不包括平板菌落數(shù)均在10個(gè)以下的情況（10個(gè)以下平板zui大與zui小菌落數(shù)的允許幅度0-3，1-5，2-7，3-9，4-10，6-13，7-14）。

2.4 菌數(shù)報(bào)告規(guī)則

細(xì)菌一般宜選取平均平板菌落數(shù)在30~300間的稀釋級(jí)，作為菌數(shù)計(jì)算的依據(jù)，霉菌宜選取平均菌數(shù)在30~100之間的稀釋級(jí)作為菌數(shù)計(jì)算的依據(jù)。

2.4.1 若有1個(gè)稀釋級(jí)的平均平板菌落數(shù)處在30~300（30~100）之間時(shí)，將該稀釋級(jí)的菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)，為報(bào)告菌數(shù)。

2.4.2 若有2個(gè)稀釋級(jí)的平均平板菌落數(shù)處在30~300（30~100） 之間時(shí)，按下式計(jì)算兩級(jí)比值。

        高稀釋級(jí)的平均平板菌落數(shù)×稀釋倍數(shù)

比值 = ———————————————————

        低稀釋級(jí)的平均平板菌落數(shù)×稀釋倍數(shù)

當(dāng)比值<2時(shí)，以兩級(jí)的菌落數(shù)均值為報(bào)告菌數(shù)；

當(dāng)比值>2時(shí)，以低稀釋級(jí)平均平板菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)為報(bào)告菌數(shù)。

2.4.3 若有3個(gè)稀釋級(jí)的平均平板菌數(shù)處在30~300（30~100）之間時(shí)，采用后2個(gè)稀釋級(jí)計(jì)算級(jí)間比值。

當(dāng)比值<2時(shí)，以兩級(jí)的菌落數(shù)均值為報(bào)告菌數(shù)；

當(dāng)比值>2時(shí)，以低稀釋級(jí)平均平板菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)為報(bào)告菌數(shù)。

2.4.4 若各稀釋級(jí)平均平板菌數(shù)均在300以上，按zui高的稀釋級(jí)的平均平板菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)為報(bào)告菌數(shù)，或適當(dāng)增中稀釋數(shù)，重作測(cè)定后報(bào)告結(jié)果。

2.4.5 若各稀釋級(jí)的平均平板菌落數(shù)均不在30~300間，其中稀釋級(jí)的平均平板菌落數(shù)大于300，相鄰稀釋的平均平板菌落數(shù)又小于30時(shí)，以zui接近30或300的稀釋級(jí)平均平板菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)為報(bào)告菌數(shù)。

2.4.6若各稀釋平均平板菌落數(shù)均小于30時(shí)，按zui低稀釋級(jí)的平均板菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)為報(bào)告菌數(shù)，但若應(yīng)用原液為供試液，當(dāng)1：10稀釋級(jí)與原液的平均平板菌落數(shù)相等或大于時(shí)，應(yīng)以培養(yǎng)基稀釋法測(cè)定。

2.5 培養(yǎng)基稀釋法：

取供試液（原液或1 :10，1：100 供試液）3份，每份各1ml，分別注入5個(gè)平皿內(nèi)（每皿積壓0.2ml），每個(gè)平皿傾注營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基約15ml，混的菌落數(shù)，共得3組數(shù)據(jù)，以3份供試液菌數(shù)的平均值乘以稀釋倍數(shù)報(bào)告。若各稀釋級(jí)平板均無菌落生長，或僅zui低稀釋級(jí)平均菌落數(shù)小于1時(shí)，則報(bào)告菌數(shù)為小于10個(gè)。

2.6 報(bào)告數(shù)書寫（細(xì)菌數(shù)報(bào)告規(guī)則舉例）

2.6.1 菌落數(shù)在100個(gè)以內(nèi)時(shí)，按實(shí)測(cè)數(shù)書寫報(bào)告。

2.6.2 菌落數(shù)大于100時(shí)，取二位有效數(shù)字，第三位數(shù)按有關(guān)數(shù)字處理規(guī)格處理，為簡便計(jì)，也可用10的指數(shù)報(bào)告。

2.7 不得按計(jì)數(shù)規(guī)則報(bào)告的情況

2.7.1 空白對(duì)照平板有菌生長，表明培養(yǎng)基已補(bǔ)污染；

2.7.2 各稀釋級(jí)平板上生產(chǎn)的菌落數(shù)不符合10倍遞增稀釋規(guī)律，菌數(shù)顯示混亂；

2.7.3 同一稀釋級(jí)的兩個(gè)平板上生長的菌落數(shù)均在15個(gè)以上，但菌數(shù)相關(guān)一倍以上；

2.7.4 菌落蔓延生覆蓋整個(gè)平板無法計(jì)數(shù)；

出現(xiàn)以上情況，該次實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)不得計(jì)數(shù)報(bào)告。

3、大腸桿菌檢查法；

3.1 檢驗(yàn)程序（見附頁）

3.2 操作步驟

3.2.1 取膽鹽乳糖培養(yǎng)基3份，每份100ml，2份分別加入規(guī)定量的供試液，其中1份加入對(duì)照菌50~100個(gè)作陽性對(duì)照，第3份加入與供試液等量的稀釋液作陰性對(duì)照。培養(yǎng)18~24小時(shí)（必要可延至48小時(shí)）。陰性對(duì)照應(yīng)無菌生長。取上述3份的培養(yǎng)物各0.2ml，分別接種至5ml MUG培養(yǎng)基管

內(nèi)培養(yǎng)，分別于5小時(shí)與24小時(shí)時(shí)，取未接種的MUG培養(yǎng)基管作本底對(duì)照，將各管置365nm紫外光下觀察。陽性對(duì)照管呈現(xiàn)熒光，MUG陽性。供試液的MUG管呈現(xiàn)熒光，MUG陽性；無熒光，MUG陰性。然后加數(shù)滴靛基質(zhì)試液于MUG管內(nèi)，液面呈玫瑰紅色為陽性，呈試劑本色為陰性。

    當(dāng)陰性對(duì)呈陰性，陽性對(duì)照正常生長，供試液膽鹽乳糖培養(yǎng)基培養(yǎng)液澄明，并證明無菌生產(chǎn)，判未檢出大腸桿菌。供試液MUG陽性，靛基質(zhì)陽性，判檢出在腸桿菌；MUG陰性，靛基質(zhì)陰性，判未檢出大腸桿菌。

    3.2.2 如MUG陽性、靛基質(zhì)陰性，或MUG陰性、靛基質(zhì)陽性，均應(yīng)取從試液膽鹽乳糖培養(yǎng)基培養(yǎng)物劃線于曙紅亞甲藍(lán)瓊脂平板或麥康凱瓊脂平板，培養(yǎng)18~24小時(shí)，如上述供試液培養(yǎng)物的分離平板無菌落生長，判未檢出大腸桿菌?；蛴芯渖L，應(yīng)挑選2~3可疑菌落作靛基質(zhì)試驗(yàn)（1）、甲基紅試驗(yàn)（M）、乙酰甲基甲醇生成試（V-P）、枸櫞酸鹽利用試驗(yàn)（C）及革蘭染色、鏡檢，按（12，2，3）規(guī)定判斷結(jié)果。

    3.2.3 靛基質(zhì)試驗(yàn)（1），取可疑菌落或斜面培養(yǎng)物，接種于蛋白胨水培養(yǎng)基中，培養(yǎng)24小時(shí)，沿管壁加入靛基質(zhì)試液數(shù)滴，液面呈玫瑰紅色為陽性，呈試劑本色為陰性。

    3.2.4 甲基紅試驗(yàn)（M），取可疑菌數(shù)或斜面培養(yǎng)物，接種于磷酸鹽葡萄胨水培基中，培養(yǎng)48小時(shí)±2小時(shí)，于管內(nèi)加入甲基紅指示液數(shù)滴，立即觀察，呈鮮紅色或橘紅色為陽性，呈黃色為陰性。

    3.2.5 乙酰甲基甲醇生成試驗(yàn)（V-P），取可疑菌落或斜面培養(yǎng)物，接種于磷酸鹽葡萄糖礴水培養(yǎng)基中，培養(yǎng)48小時(shí)±2小時(shí)，于每2ml培養(yǎng)液中加入 -萘酚乙醇試液1ml，混勻，再加40%氫氧化鉀溶液0.4ml，充分振搖，在4小時(shí)內(nèi)出現(xiàn)紅色為陽性，無紅色反應(yīng)為陰性。

    3.2.6 枸櫞酸鹽利用試驗(yàn)（C） ，取可疑菌落或斜面培養(yǎng)物，接種于枸櫞酸鹽培養(yǎng)基的斜面上，一般培養(yǎng)48~72小時(shí)，培養(yǎng)基斜面有菌落生長，培養(yǎng)基由綠色變?yōu)樗{(lán)色時(shí)為陽性，培養(yǎng)基顏色無改變?yōu)殛幮浴?/SPAN>

    3.2.7 革蘭氏染色法、鏡檢

    試劑；

結(jié)晶紫染液：取結(jié)晶紫1.0g溶于95%乙醇20ml，與1%草酸銨溶液80ml混勻，靜置48h備用。

革蘭氏碘液，先用3~5ml蒸餾水溶解2.0g碘化鉀，再加入磺片1.0g，待全溶后，加蒸餾水稀釋至300ml，備用。

沙黃（蕃紅）染液：將沙黃0.25g溶于95%乙醇10ml中，待全溶解后再加蒸餾水至100ml，即可。

染色法：用接種環(huán)沾取無菌水，置于潔凈載玻片上，再挑取少許菌苔，輕輕研開，使均勻。涂片自然風(fēng)干或微熱烤干，而后通過火焰2~3次以固定涂片。滴加結(jié)晶紫梁液，染色1分鐘，水洗，滴加磺液媒染1分鐘，水洗，甩干余水，滴加95%乙醇脫色，約20~30秒，水洗，吸干，滴加沙黃復(fù)染液，染1分鐘，水洗，待干，鏡檢。

染色結(jié)果：革蘭氏陽性菌呈藍(lán)紫色，陰性菌呈紅色。

3.3 結(jié)果判斷見下表：

3.3.1 對(duì)與MUG-1反應(yīng)不符合可疑菌株。如表中（1）出現(xiàn)++--或（2）出現(xiàn)-+--，均應(yīng)重新分離菌株，再作MUG-1和IMVic試驗(yàn)。

4、活螨檢查法：

4.1 設(shè)備和材料

    顯微鏡、雙筒實(shí)體顯微鏡

    放大鏡

    解剖針、發(fā)絲針、小毛筆

    載玻片、蓋玻片

    酒精燈

    培養(yǎng)皿或小搪瓷盤（內(nèi)襯黑色）

    30%甘油水

    4.2螨的形態(tài)特征

    螨的體形微小，多在1mm以下，一般呈卵圓形或橢圓形、無頭胸、腹界限。幼螨足三對(duì)，若螨足四對(duì)，成螨足多數(shù)為四對(duì)。足通常由六節(jié)組成?？谄飨蚯巴怀觯３黍Q狀，由2-3節(jié)組成。須肢節(jié)數(shù)因種類而異，

由1-2節(jié)到5節(jié)組成，一般呈爪或鉗狀，偶爾為長形。有些種類在軀體前端或兩側(cè)有1-2對(duì)眼。軀體兩側(cè)對(duì)稱，表面有被有堅(jiān)硬的幾丁質(zhì)的板，保護(hù)其內(nèi)部器官和支持肌肉固定。體表有剛毛，它的形狀、數(shù)目及彼此長短比例和排列位置因種類而異。

    螨類與蜘蛛、昆蟲（書虱），外形比較的近似，因此，必須注意它們之間的主要區(qū)別，見下表：

螨與蜘蝗、昆蟲主要形態(tài)鑒別

4.3 檢查方法：

4.3.1 直檢法：取供試品先用肉眼觀察，有無疑似活螨的白點(diǎn)或其它顏色的點(diǎn)狀物，再用5-10倍放大鏡或雙筒實(shí)體顯微鏡檢視，有螨者，用解剖針或發(fā)絲針或小毛筆挑取活螨放在滴一滴甘油水的載玻片上，置顯微鏡下觀察。

4.3.2 漂浮法：將供試品放在盛大有飽和食鹽水的扁形稱量瓶或適宜的容器內(nèi)，加飽和食鹽水至容器的三分之二處，攪拌均勻，置10倍放大鏡或雙筒實(shí)體顯微鏡下檢查，或繼續(xù)加飽和食鹽水至瓶口處（為防止鹽水和樣品溢出污染桌面，宜將上述容器放在裝有適量甘油水的培養(yǎng)皿中），用潔凈的載玻片蓋在瓶口上，使玻片與液面接觸，沾取液面上的漂浮物，置顯微鏡下檢查。

4.3.3 分離法：也稱烤螨法。將供試品放在特制的分離器或附有孔徑大小適宜的篩網(wǎng)的普法玻璃漏斗里，利用活螨避銚、怕熱的習(xí)性，在漏斗的廣口上面放一個(gè)60~100W的燈泡，距離藥品約6cm處，照射1-2小時(shí)?；铗裳刂┒穬?nèi)的底部*內(nèi)壁向下爬，用小燒杯裝半杯甘油水，放在漏斗的下口處，收集爬出來的活螨。

4.4 活螨卵的檢驗(yàn)方法：

螨卵極小，一般在0.1mm以正是，呈乳白色，橢圓形或卵圓形。須用10-20倍放大鏡或顯微鏡方可查見。螨卵常見于活螨的周圍，但在未檢出活螨的樣品中，亦有檢出螨卵者。一般在供試品中已經(jīng)檢出活螨的，不再進(jìn)行螨卵的檢查。對(duì)可疑供試品，未檢出活螨時(shí)，可注意檢查活螨卵。

檢驗(yàn)方法：可采用檢驗(yàn)活螨項(xiàng)下的直檢法或漂浮法檢查。凡用上述由1-2節(jié)到5節(jié)組成，一般呈爪或鉗狀，偶爾為長形。有些種類在軀體前端或兩側(cè)有1-2對(duì)眼。軀體兩側(cè)對(duì)稱，表面有被有堅(jiān)硬的幾丁質(zhì)的板，保護(hù)其內(nèi)部器官和支持肌肉固定。體表有剛毛，它的形狀、數(shù)目及彼此長短比例和排列位置因種類而異。

    螨類與蜘蛛、昆蟲（書虱），外形比較的近似，因此，必須注意它們之間的主要區(qū)別，見下表：

螨與蜘蝗、昆蟲主要形態(tài)鑒別

4.3 檢查方法：

4.3.1 直檢法：取供試品先用肉眼觀察，有無疑似活螨的白點(diǎn)或其它顏色的點(diǎn)狀物，再用5-10倍放大鏡或雙筒實(shí)體顯微鏡檢視，有螨者，用解剖針或發(fā)絲針或小毛筆挑取活螨放在滴一滴甘油水的載玻片上，置顯微鏡下觀察。

4.3.2 漂浮法：將供試品放在盛大有飽和食鹽水的扁形稱量瓶或適宜的容器內(nèi)，加飽和食鹽水至容器的三分之二處，攪拌均勻，置10倍放大鏡或雙筒實(shí)體顯微鏡下檢查，或繼續(xù)加飽和食鹽水至瓶口處（為防止鹽水和樣品溢出污染桌面，宜將上述容器放在裝有適量甘油水的培養(yǎng)皿中），用潔凈的載玻片蓋在瓶口上，使玻片與液面接觸，沾取液面上的漂浮物，置顯微鏡下檢查。

4.3.3 分離法：也稱烤螨法。將供試品放在特制的分離器或附有孔徑大小適宜的篩網(wǎng)的普法玻璃漏斗里，利用活螨避銚、怕熱的習(xí)性，在漏斗的廣口上面放一個(gè)60~100W的燈泡，距離藥品約6cm處，照射1-2小時(shí)。活螨可沿著漏斗內(nèi)的底部*內(nèi)壁向下爬，用小燒杯裝半杯甘油水，放在漏斗的下口處，收集爬出來的活螨。

4.4 活螨卵的檢驗(yàn)方法：

螨卵極小，一般在0.1mm以正是，呈乳白色，橢圓形或卵圓形。須用10-20倍放大鏡或顯微鏡方可查見。螨卵常見于活螨的周圍，但在未檢出活螨的樣品中，亦有檢出螨卵者。一般在供試品中已經(jīng)檢出活螨的，不再進(jìn)行螨卵的檢查。對(duì)可疑供試品，未檢出活螨時(shí)，可注意檢查活螨卵。

*MUG管紫外觀察，顯熒光為陽性，MUG+；

                  無熒光為陰性，MUG-。

*MUG管靛基質(zhì)顯色，MUG管內(nèi)，液面呈玫瑰紅為陽性，I+；

                                液面呈試劑本色為陰性，I-。

檢驗(yàn)方法：可采用檢驗(yàn)活螨項(xiàng)下的直檢法或漂浮法檢查。凡用上述

取膽鹽乳糖培養(yǎng)基36g，加1000ml蒸餾水，加熱溶解，分裝，116℃高壓滅菌20分鐘。

4、麥康凱瓊脂培養(yǎng)基（MacC）

取麥康凱瓊脂培養(yǎng)基54g，加1000ml蒸餾水，加熱溶解，分裝，116℃高壓滅菌20分鐘。

5、磷酸鹽葡萄胨水培養(yǎng)基15.8g，加1000ml蒸餾水，加熱溶解，分裝，116℃高壓滅菌20分鐘。

6、蛋白胨水培養(yǎng)基

取蛋白胨水培養(yǎng)基15g，加1000ml蒸餾水，加熱溶解，分裝，116℃高壓滅菌20分鐘。

7、枸櫞酸鹽培養(yǎng)基

取枸櫞酸鹽培養(yǎng)基22g，加1000ml蒸餾水，加熱溶解，分裝，116℃高壓滅菌20分鐘。

8、4-甲基傘形酮葡萄苷酸培養(yǎng)基（MUG）

取4-甲基傘形酮葡萄苷酸培養(yǎng)  g，加1000ml蒸餾水，分裝，115℃高壓滅菌20分鐘。

注：培養(yǎng)基（生物試劑）中國藥品生物制品檢定所生產(chǎn)。

六、試液

1、0.1%2，3，5-氯化三苯基四氮性（TTC）溶液。

1.1 配制：取2，3，5-氯化三苯基四氮唑0.1g溶于100ml蒸餾水，滅菌，備用。

1.2  用途：供制備培養(yǎng)基用。

2、無菌對(duì)氨基苯甲酸試液

2.1  配制：取對(duì)氨基苯甲酸0.1g，加入含10ml水的具塞試管中，121℃滅菌20分鐘。

2.2  用途：供磺胺類藥物檢驗(yàn)用。

3、氫氧化鉀試液

3.1  配制：取氫氧化鉀40g，加水溶解使成100ml。

3.2  用途：供作V-P反應(yīng)試劑。

4、 -萘酚乙醇溶液

4.1  配制：取 -萘酚6.0g，加無水乙醇溶解使成100ml。

4.2  用途：供作V-P反應(yīng)試劑。

5、靛基質(zhì)試液

七、稀釋劑

1、0.9%無菌氯化鈉溶液

取氯化鈉9.0g，加水溶解使成1000ml，121℃滅菌20分鐘。

2、無菌磷酸鹽緩沖液（PH7.2）

取磷酸氫二鈉25.8g與磷酸二氫鈉4.4g，加水稀釋至1000ml，121℃滅菌20分鐘。

八、指示液

1、甲基紅指示液

取甲基紅0.1g，加95%乙醇300ml，使溶解后，加水至500ml，即得。

2、溴麝香草酚指示液

取溴麝香草酚藍(lán)0.4g，加1mol/L氫氧化鈉溶液0.64ml使溶解，再加水至100ml，變色范圍6.0~7.6（黃—藍(lán)）

九、供試品的檢驗(yàn)量：

1、每批供試品檢驗(yàn)量一般為10g 或10ml，化學(xué)膜劑為100cm2，貴重的或微量包裝的供試品檢驗(yàn)量可酌減，但口服藥品不得少于3g，外用藥品不得少于5g。

2、供試品須取自2個(gè)以上的包裝單位。

十、供試液的制備

1、液體供試品：取供試品10ml，加入稀釋劑90ml，混勻，作為供試液。

2、固體供試品：取供試品10g，置0.9%無菌氯化鈉溶液100ml中，用勻漿儀或其他適宜方法混勻后，作為供試液。

3、腸溶膠囊（片）供試品：取供試品10g，置含有無菌磷酸鹽緩沖液（PH6.8）100ml的錐形瓶內(nèi)，于45℃水浴中，保溫，振搖，使溶解，作為供試液。

4、含抑菌成分供試品的供試液制備方法：

4.1 離心沉淀法：

可溶性供試液：取供試液10ml，置入刻度離心管中，以3000轉(zhuǎn)/分以上離心沉淀30分鐘，用毛細(xì)管吸取上清液棄掉，留下管底約2ml殘余液，將其全部洗入增菌培養(yǎng)基中，作控制菌檢查。

混懸供試液：取供試液 10ml，置刻度離心管中，先以500轉(zhuǎn)/分離心沉淀5分鐘，取其上清液移入另一離心管中，再經(jīng)3000轉(zhuǎn)/分以上離心沉淀30分鐘，棄去上清液，保留約2ml殘余液，全部洗入增菌培養(yǎng)基中，作控制菌檢驗(yàn)。

4.2 鈍化劑中和法：

磺胺類藥物中和法：取規(guī)定量的供試液，加入含有無菌1%對(duì)氨基苯甲酸試液0.5ml的100ml增菌液中，作增菌培養(yǎng)即可。

4.3沉降法：

取規(guī)定量的供試液，自然沉降5分鐘，吸取上層液于含1%的氨基苯甲酸1ml的增菌液，作增菌培養(yǎng)即得。

十二、對(duì)照試驗(yàn)：

1.1  陰性對(duì)照試驗(yàn)：測(cè)試檢驗(yàn)全過程無菌技術(shù)的可靠性。

1.2  控制菌檢驗(yàn)陰性對(duì)照試驗(yàn)：用吸管從供用的稀釋劑中吸取1ml于增菌液中，按控制菌檢驗(yàn)方法檢查，不得長菌。

2、陽性對(duì)照試驗(yàn)：檢查供試品是否對(duì)控制菌生長產(chǎn)生干擾作用及檢查培養(yǎng)條件是否適宜。

2.1 陽性對(duì)照試驗(yàn)：方法同供試品檢驗(yàn)，于供試液中加入一定量的相應(yīng)對(duì)照菌，作為平行試驗(yàn)。

2.2 規(guī)定陽性對(duì)照株：大腸桿菌[CMCC（B）44102]

2.3對(duì)照菌的加入量為50-100個(gè)，可事先前預(yù)先確定，需氣菌常用計(jì)數(shù)方法，取36℃±1℃培養(yǎng)18~20小時(shí)的新鮮肉湯培養(yǎng)物，10倍遞增稀釋至10^-6，取其0.1ml于營養(yǎng)瓊脂平板表面涂抹或取10^-7稀釋液1ml以注皿法進(jìn)行菌數(shù)測(cè)定。

2.4 當(dāng)供試品未檢出控制菌時(shí)，而陽性對(duì)照試驗(yàn)也未能檢出，不能做出供試品未檢出控制菌的結(jié)論。

2.5 陽性對(duì)照試驗(yàn)操作必須與供試品檢驗(yàn)作嚴(yán)格分開，避免交叉污染。