以淀粉膠、瓊脂或瓊脂糖凝膠、聚丙烯酰胺凝膠等作為支持介質(zhì)的區(qū)帶電泳法稱(chēng)為凝膠電泳。其中聚丙烯酰胺凝膠電泳（polyacrylamide gel electrophoresis，PAGE）普遍用于分離蛋白質(zhì)及較小分子的核酸。瓊脂糖凝膠孔徑較大，對(duì)一般蛋白質(zhì)不起分子篩作用，但適用于分離同工酶及其亞型，大分子核酸等應(yīng)用較廣，介紹如下（凝膠成像分析系統(tǒng)）：
　?、?a >瓊脂糖凝膠電泳的原理概述  瓊脂糖是由瓊脂分離制備的鏈狀多糖。其結(jié)構(gòu)單元是D-半乳糖和3.6-脫水-L-半乳糖。許多瓊脂糖鏈依氫鍵及其它力的作用使其互相盤(pán)繞形成繩狀瓊脂糖束，構(gòu)成大網(wǎng)孔型凝膠。因此該凝膠適合于免疫復(fù)合物、核酸與核蛋白的分離、鑒定及純化。在臨床生化檢驗(yàn)中常用于LDH、CK等同工酶的檢測(cè)。
　?、?a >瓊脂糖凝膠電泳分離核酸的基本技術(shù)  在一定濃度的瓊脂糖凝膠介質(zhì)中，DNA分子的電泳遷移率與其分子量的常用對(duì)數(shù)成反比；分子構(gòu)型也對(duì)遷移率有影響，如共價(jià)閉環(huán)DNA＞直線DNA＞開(kāi)環(huán)雙鏈DNA。當(dāng)凝膠濃度太高時(shí)，凝膠孔徑變小，環(huán)狀DNA（球形）不能進(jìn)入膠中，相對(duì)遷移率為0，而同等大小的直線DNA（剛性棒狀）可以按長(zhǎng)軸方向前移，相對(duì)遷移率大于0。
　?、旁O(shè)備與試劑：瓊脂糖凝膠電泳分為垂直及水平型兩種。其中水平型可制備低濃度瓊脂糖凝膠，而且制膠與加樣都比較方便，故應(yīng)用比較廣泛。核酸分離一般用連續(xù)緩沖體系，常用的有TBE（0.08mol/L Tris·HCl，pH8.5，0.08mol/L硼酸，0.0024mol/L EDTA）和THE（0.04mol/L Tris·HCl。pH7.8，0.2mol/L醋酸鈉，0.0018mol/L EDTA）。
　?、颇z制備：用上述緩沖液配制0.5％-0.8％瓊脂糖凝膠溶液，沸水浴或微波爐加熱使之融化，冷至55℃時(shí)加入溴化乙錠（EB）至終濃度為0.5μg/ml，然后將其注入玻璃板或有機(jī)玻璃板組裝好的模子中，厚度依樣品濃度而定。注膠時(shí)，梳齒下端距玻璃板0.5-1.0mm，待脫凝固后，取出梳子，加入適量電極緩沖液使板膠浸沒(méi)在緩沖液下1mm處。
　?、菢悠分苽渑c加樣：溶解于TBE或THE內(nèi)的樣品應(yīng)含指示染料（0.025％溴酚藍(lán)或桔黃橙）、蔗糖（10％-15％）或甘油（5％-10％），也可使用2.5％Fico Ⅱ增加比重，使樣品集中，每齒孔可加樣5-10μg。
　?、入娪荆阂话汶妷簽?-15V/cm。對(duì)大分子的分離可用電壓5V/cm。電泳過(guò)程在低溫條件下進(jìn)行。
　?、蓸悠坊厥眨弘娪窘Y(jié)束后在紫外燈下觀察樣品的分離情況，對(duì)需要的DNA分子或特殊片段可從電泳后的凝膠中以不同的方法進(jìn)行回收，如電泳洗脫法：在紫外燈下切取含核酸區(qū)帶的凝膠，將其裝入透析袋（內(nèi)含適量新鮮電泳緩沖液），扎緊透析袋后，平放在水平型電泳槽兩電極之間的淺層緩沖液中，100V電泳2-3小時(shí)，然后正負(fù)電極交換，反向電泳2分鐘，使透析袋上的DNA釋放出來(lái)。吸出含DNA的溶液，進(jìn)行酚抽提、乙醇沉淀等步驟即可完成樣品的回收。
其它還有低融點(diǎn)瓊脂糖法、醋酸銨溶液浸出法、冷凍擠壓法等，但各種方法都僅僅有利于小分子量DNA片段（＜1kb＝的回收，隨著DNA分子量的增大，回收量顯著下降。同時(shí)也可用于凝膠成像系統(tǒng)

文章關(guān)鍵詞：凝膠成像分析系統(tǒng)，瓊脂糖凝膠，凝膠電泳