質(zhì)粒DNA的提取是從事基因工程工作中的一項(xiàng)基本實(shí)驗(yàn)技術(shù)，但提取方法有很多種，以下介紹一種zui常用的方法：
堿裂解法：此方法適用于小量質(zhì)粒DNA的提取，提取的質(zhì)粒DNA可直接用于酶切、PCR擴(kuò)增、銀染序列分析。方法如下：
1、接1%含質(zhì)粒的大腸桿菌細(xì)胞于2ml LB培養(yǎng)基。
2、37℃振蕩培養(yǎng)過夜。
3、取1.5ml菌體于Ep管，以4000rpm離心3min，棄上清液。
4、加0.lml溶液I（1％葡萄糖，50mM/L EDTA pH8.0，25mM/L Tris-HCl pH8.0）充分混合。
5、加入0.2ml溶液 II（0.2 mM/L NaOH，1％ SDS），輕輕翻轉(zhuǎn)混勻，置于冰浴5 min 。
6、加入0.15m1預(yù)冷溶液III（5 mol/L KAc，pH4.8），輕輕翻轉(zhuǎn)混勻，置于冰浴5 min 。
7、以10，000rpm離心20min，取上清液于另一新Ep管
8、加入等體積的異戊醇，混勻后于?0℃靜置10min。
9、再以10，000rpm離心20min，棄上清。
10、用70％乙醇0．5ml洗滌一次，抽干所有液體。
11、待沉淀干燥后，溶于0．05mlTE緩沖液中  
煮沸法 
1、將1.5ml培養(yǎng)液倒入eppendorf管中,4℃下12000ｇ離心30秒。
2、棄上清，將管倒置于衛(wèi)生紙上幾分鐘，使液體流盡。 
3、將菌體沉淀懸浮于120ml STET溶液中, 渦旋混勻。 
4、加入10ml新配制的溶菌酶溶液（10mg/ml）, 渦旋振蕩3秒鐘。
5、將eppendorf管放入沸水浴中,50秒后立即取出。 
6、用微量離心機(jī)4℃下12000g離心10分鐘。
7、用無菌牙簽從eppendorf管中去除細(xì)菌碎片。 
8、取20ml進(jìn)行電泳檢查。 
質(zhì)粒DNA的大量提取和純化DNA的提取 
在制作酶譜、測(cè)定序列、制備探針等實(shí)驗(yàn)中需要高純度、高濃度的質(zhì)粒DNA,為此需要大量提取質(zhì)粒DNA。大量提取的質(zhì)粒DNA一般需進(jìn)一步純化,常用柱層析法和氯化絕梯度離心法。
（一）、堿法 
1、取培養(yǎng)至對(duì)數(shù)生長后期的含pBS質(zhì)粒的細(xì)菌培養(yǎng)液250ml，4℃下5000g離心15分鐘,棄上清,將離心管倒置使上清液全部流盡。 
2、將細(xì)菌沉淀重新懸浮于50ml用冰預(yù)冷的STE中（此步可省略）。 
3、同步驟1方法離心以收集細(xì)菌細(xì)胞。 
4、將細(xì)菌沉淀物重新懸浮于5ml溶液I中,充分懸浮菌體細(xì)胞。 
5、加入12ml新配制的溶液II, 蓋緊瓶蓋,緩緩地顛倒離心管數(shù)次,以充分混勻內(nèi)容物,冰浴10分鐘。 
6、加9ml用冰預(yù)冷的溶液III, 搖動(dòng)離心管數(shù)次以混勻內(nèi)容物,冰上放置15分鐘,此時(shí)應(yīng)形成白色絮狀沉淀。
7、4℃下5000g離心15分鐘。 
8、取上清液,加入50ml RNA酶A（10mg/ml）, 37℃水浴20分鐘。 
9、加入等體積的飽和酚/氯仿,振蕩混勻,4℃下12000g離心10分鐘。 
10、取上層水相, 加入等體積氯仿,振蕩混勻,4℃下12000g離心10分鐘。 
11、取上層水相,加入1/5體積的4mol/L NaCl和10% PEG（分子量6000）, 冰上放置60分鐘。 
12、4℃下12000g離心15分鐘, 沉淀用數(shù)ml 70%冰冷乙醇洗滌，4℃下12000g離心5分鐘。 
13、真空抽干沉淀，溶于500ml TE或水中。 

質(zhì)粒DNA瓊脂糖凝膠電泳鑒定 DNA的提取
瓊脂糖是從海藻中提取出來的一種線狀高聚物，應(yīng)選用電泳純的，瓊脂糖此級(jí)產(chǎn)品篩除了抑制物和核酸酶，而且用溴化乙錠染色后熒光背景zui小。
（1）瓊脂糖凝膠電泳裝置
由于瓊脂糖凝膠電泳既要求不高，而適應(yīng)性又強(qiáng)，在過去20年里已成功地設(shè)計(jì)了形形色色及大大小小的電泳槽。對(duì)這些裝置的選擇主要是依據(jù)個(gè)人的喜惡。使用zui普遍的裝置是Walter Schaffner發(fā)明的水平板凝膠。
水平板凝膠通常在一塊可安放于電泳槽平臺(tái)的玻璃板或塑料盤上灌制。在有些裝置中，則可將凝膠直接鋪在平臺(tái)上。凝膠恰好浸在緩沖液液面下進(jìn)行電泳。凝膠的電阻幾乎與緩沖液的電阻相同，所以有相當(dāng)一部分的電流將通過凝膠的全長。
（2）瓊脂糖凝膠的制備
瓊脂糖凝膠的制備是將瓊脂糖在所需緩沖液中熔化成清澈、透明的溶液。然后將熔化液倒入膠模中，令其固化。凝固后，瓊脂糖形成一種固體基質(zhì)，其密度取決于瓊脂糖的濃度。通貫?zāi)z的電場(chǎng)接通后，在中性pH值下帶負(fù)電荷的DNA向陽極遷移。
（3）瓊脂糖凝膠的染色
電泳完畢，將瓊脂糖凝膠轉(zhuǎn)移入含EB的染液中，染色10分鐘，取出紫外燈下觀察

文章關(guān)鍵詞：DNA的提取