分光光度法快速測食用油中氧化物的過氧化值含量

食用油標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立

美析儀器有限公司

前言

變質(zhì)油脂產(chǎn)生的過氧化物等有毒物質(zhì)使血紅蛋白2價鐵轉(zhuǎn)變?yōu)檠t蛋白3 價鐵，其毒性作用使血紅蛋白失去攜氧功能，造成機(jī)體缺氧，而出現(xiàn)黏膜、皮膚紫紺。 

酸敗物質(zhì)的氧化物對機(jī)體酶系中的琥珀酸氧化酶、細(xì)胞色素氧化酶等重要酶系有直接破壞作用，干擾細(xì)胞內(nèi)的三羧循環(huán)、氧化磷酸化，使細(xì)胞內(nèi)能量代謝發(fā)生障礙，產(chǎn)生細(xì)胞內(nèi)窒息，使患者出現(xiàn)急性呼吸、循環(huán)功能衰竭現(xiàn)象。

     油脂的氧化深度即油脂氧化物的過氧化值，直接影響加脂劑的質(zhì)量與性能，因此測定油脂氧化物的過氧化值以確定油脂的氧化深度具有重要意義。目前采用的經(jīng)典方法是碘量法，該法操作繁瑣，人為因素影響大，對環(huán)境和操作者危害大。 本實驗借助分光光度法對食用油的過氧化值進(jìn)行測定通過油脂酸價的檢驗，評定油脂品質(zhì)的優(yōu)劣，判斷油脂儲藏期間品質(zhì)的變化情況，讓我們對油類食品食得更放心。

1、實驗?zāi)康?/span> 

食用油的過氧化物在三氯甲烷一冰乙酸介質(zhì)中與KI溶液反應(yīng)生成I2，將生成的I2與淀粉反應(yīng)顯藍(lán)色，使用分光光度計測定測定食用油的吸光度A值，根據(jù)I2的標(biāo)準(zhǔn)溶液曲線確定反應(yīng)中消耗I2的濃度c，再根據(jù)消耗I2的濃度計算出油脂中過氧化物的過氧化值，從而評定油脂品質(zhì)的優(yōu)劣，判斷油脂儲藏期間品質(zhì)的變化情況。

2、實驗原理 

食用油的過氧化物在三氯甲烷一冰乙酸介質(zhì)中與KI溶液反應(yīng)生成I2，將生成的I2與淀粉反應(yīng)顯藍(lán)色，使用分光光度計測定測定食用油的吸光度A值。

R—OOH+2KI+2H^+=I2+R-OH+H2+2K^

用c=0.1mol/L Na2S203標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定c=0.1mol/L I2溶液，配制成標(biāo)準(zhǔn)溶液

I2+2Na2S2O3=Na2S4O6+2NaI

將c=0.1mol/L I2的標(biāo)準(zhǔn)溶液分別配制成0.0002 mol/L，0.0004 mol/L，0.001mol/L，0.002mol/L，0.003mol/L，0.004 mol/L，0.006 mol/L和0.008mol/L，在535nm波長下用分光光度計分別測出吸光度A值，以I2使用溶液濃度為橫坐標(biāo)，以吸光值為縱坐標(biāo)，繪制I2的標(biāo)準(zhǔn)溶液工作曲線，然后將食用油過氧化物與KI溶液反應(yīng)產(chǎn)生的I2的吸光度值A在工作曲線確定反應(yīng)產(chǎn)生的I2濃度，代進(jìn)公式求出油脂中過氧化物的過氧化值。

3、實驗設(shè)備 

燒杯（50mL,250mL,500mL），電熱干燥箱，碘量瓶（250mL）,量筒（10mL），棕色酸式滴定管（25.00mL），電子天平（0.01g），容量瓶（100mL,250mL,500mL），移液管（25.00mL），具塞比色管(50mL)，吸量管（1.00mL），棕色試劑瓶（500mL）,電爐，試管架，玻璃棒，鐵架臺，洗耳球。

美析儀器V-1100型分光光度計

4、實驗材料及試劑 

4.1溶液制備

（1）氯仿一冰乙酸混合溶劑(40：60) （2）1%飽和淀粉溶液指示劑

（3）10%碘化鉀溶液（c=8.43mol/L或1400g/L） （4）c=0.1mol/L I2標(biāo)準(zhǔn)溶液 

4.2實驗材料  

碘化鉀（固體），c=0.1mol/L Na2S203標(biāo)準(zhǔn)溶液，氯仿，冰乙酸，10g／L淀粉溶液，食用油，水，6mol/L HCl，I2(AR固體)，K2Cr2O7(AR、105-110烘干1小時)

5、操作步驟 

5.1 10%碘化鉀溶液的配制

用分析天平稱取10.00g碘化鉀固體置于50mL燒杯中，加入適量蒸餾水溶解，然后將溶解的碘化鉀移入100mL容量瓶中，加蒸餾水到刻度線，蓋上瓶塞，搖勻，置于陰涼處，待用。

5.2氯仿一冰乙酸混合溶劑配制

取40mL氯仿于燒杯中，然后再用100mL量筒取60mL冰乙酸倒入燒杯中混合，待用。

5.3 I2準(zhǔn)溶液的配制與標(biāo)定

6.2.1  I2配制:稱取6.5g碘單質(zhì)于燒杯中，再稱取20gKI（三倍與碘重的碘化鉀）用50ml蒸餾水溶于500mL燒杯中，然后將I2倒入KI溶液中，使其*溶解，加水稀釋至約500mL，滴加濃HCl三滴，zui后將溶液倒入棕色試劑瓶中避光保存。 

6.2.2   I2標(biāo)定:用25.00mL吸量管吸取c=0.1mol/L Na2S203標(biāo)準(zhǔn)溶液，加入50mL

蒸餾水，再加入1mL%淀粉溶液，用I2液滴定呈淡藍(lán)色，平行三次。記下V（I2）。

碘單質(zhì)的質(zhì)量濃度=（25.00×c）/V

式中： c為Na2S203標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度mol/L，V為滴定時需要的碘溶液的體積/mL 

6.2.3   0.1mol/L I2標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備：吸取10 mL經(jīng)標(biāo)定的I2原液于200 mL容量瓶中，用蒸餾水稀釋至刻度。

6.2.4 溶液標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

6.3.1  分別吸取0.1mol/L I2標(biāo)準(zhǔn)溶液0.1 mL、0.2 mL、0.5 mL、1.0 mL、1.5 mL、2.0 mL、3.0 mL、4.0 mL用具塞比色管稀釋至50 mL，配制成0.0002 mol/L，0.0004 mol/L，0.001  mol/L，0.002 mol/L，0.003 mol/L，0.004 mol/L，0.006 mol/L和0.008 mol/L，的I2標(biāo)準(zhǔn)溶液。 

6.3.2  用移液管分別吸取上述標(biāo)準(zhǔn)溶液5 mL于比色管中，加入氯仿和冰醋酸混合液5 mL，再滴加3滴1%飽和淀粉溶液指示劑，加蓋并搖勻；再取另一只試管吸取5 mL蒸餾水和5 mL氯仿和冰醋酸混合液，再滴加3滴1%飽和淀粉溶液指示劑，加蓋并搖勻，作為參比溶液。 

6.3.3  用膠頭滴管分別吸取上述溶液，用分光光度計在波長535nm條件下測定顯色后溶液的吸光度A，并記錄數(shù)據(jù)。 

6.3.4  以I2標(biāo)準(zhǔn)溶液質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，相應(yīng)的吸光度為縱坐標(biāo)，繪制I2標(biāo)準(zhǔn)溶液的標(biāo)準(zhǔn)曲線。

6.5 食用油的收集

在市面上購買散裝食用油，然后用燒杯取出適量，靜置，待用。

6.6食 用油氧化物的過氧化值測定

6.6.1  用電子分析天平稱取0.20g食用油于碘量瓶中，用吸量管吸取氯仿一冰乙酸5mL于食用油中，用量筒量取10mL10%碘化鉀溶液，倒入碘量瓶中，再滴加3滴1%飽和淀粉溶液指示劑，蓋上瓶塞，充分搖勻，靜置5min。另5mL蒸餾水、1%飽和淀粉溶液指示劑和5mL氯仿和冰醋酸混合液作為參比溶液。 

6.6.2  用膠頭滴管吸取適量的混合液于比色皿中，用分光光度計在535nm波長下測定吸光度值，記錄數(shù)據(jù)。 

6.6.3  根據(jù)所測得的吸光度，從I2溶液標(biāo)準(zhǔn)曲線上查的對應(yīng)的I2濃度，按下式計算過氧化值的值 (1)c=A/(k•L)

式中:A為油樣中的測定的吸光度值，k為吸光系數(shù)，L為溶液的厚度 (2)X=m/(m1×10)

式中：m為樣品的吸光值對應(yīng)的碘的質(zhì)量mg ；m1為樣品的質(zhì)量g， 6.6.4平行實驗3次，分別記錄測試結(jié)果，并計算平均值。

7、實驗結(jié)果 

7.1  I2標(biāo)液工作曲線數(shù)據(jù)表

以I2使用溶液濃度為橫坐標(biāo)，以吸光值為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,數(shù)據(jù)統(tǒng)計表如表略。

7.2用分光光樣度計對同一油樣過氧化物值進(jìn)行3次測定

8、注意事項 

8.1應(yīng)當(dāng)注意在完成Na2S203溶液的配制后，必須確保貯存7天后方可使用，否則也會影響測試的準(zhǔn)確性。

8.2在采取具有代表性的樣品過程中，應(yīng)當(dāng)及時對樣品進(jìn)行規(guī)范的封存，否則會影響測試結(jié)果的準(zhǔn)確性。

8.3吸光度讀數(shù)應(yīng)控制在0.1–0.7之間，以免產(chǎn)生較大誤差。