徠卡熒光顯微鏡本體
    徠卡熒光顯微鏡是任何顯微木的基本工具，它的主要作用是使被撿標(biāo)本圖象得到不同程度的放大。在徠卡熒光顯微鏡中，熒光光源裝置是提供一定波長的激發(fā)光使被校標(biāo)本受激發(fā)射熒光，再通過顯微鏡的物鏡，B鏡系統(tǒng)使熒光圖象放大以供觀察，因此，一般來說，任何顯微鏡都可以用于熒光顯微術(shù)。不玖由于徠卡熒光顯檄鏡所放大的象是熒光圖象，必須根據(jù)熒光產(chǎn)生和表現(xiàn)的特點(diǎn)，因此在使用方法—L略有講災(zāi)。
    一般的徠卡熒光顯微鏡的光學(xué)元件，大都果用普通光學(xué)玻璃制造。它們對(duì)30 A以上的長波紫外線和可見光能很好地透過，因此完滿足——殷熒光顯微術(shù)的要求，只是在個(gè)別情況下，當(dāng)標(biāo)本必須用短波紫外線激發(fā)時(shí)，才需用石英玻璃或特種玻璃的聚光鏡和反射執(zhí)這時(shí)殘破片也必須是特制晰但在進(jìn)射光顯檄術(shù)時(shí)，物鏡和目鏡只需用普通光學(xué)玻璃即可。如在反射光顯微術(shù)時(shí)，則物鏡必須能透過紫外光的?，F(xiàn)就熒光顯微木的特點(diǎn)，介紹一下徠卡熒光顯微境備部分的性能特點(diǎn)。
    （1）反光鏡  其反光層以鍍鋁為沉因?yàn)殇X對(duì)紫外光和可見光的紫藍(lán)區(qū)吸收少，反射率達(dá)90％以上，而鍍銀的反射串只達(dá)70％，另外應(yīng)采用外反射，以避免光線來回經(jīng)過玻璃而引起損失。同時(shí)要使用平面反光鏡而不使用凹面反光鼠這樣使光源射來的光線簽水平行。
    （2）聚光器  聚光器有三種；明場(chǎng)聚光器、暗場(chǎng)聚光器和相襯熒光聚光器。
    ①明場(chǎng)聚光器  假如標(biāo)本可用較長的光波來激發(fā)成熒光，則習(xí)，9阿貝聚光鏡，而微列的焚光或須用短波紫外光作光源的話，則必須用石英玻璃和熒石玻璃等材料制作的聚光鏡，否則，第外光將會(huì)全部被普通玻璃所吸收。另外，由于油浸鎮(zhèn)頭的香柏油會(huì)自發(fā)熒光，會(huì)擾亂觀院所以不空使用，必須使用不發(fā)熒光的化學(xué)純甘油或檀香油等。
    ②暗場(chǎng)聚光器  由于使用暗場(chǎng)聚光器時(shí)，激發(fā)光不直接進(jìn)入物鏡，而不致直接射入眼睛，這樣激發(fā)濾片可以大大減薄，從而顯著地增大了激發(fā)光的強(qiáng)度，抑制濾片也可以很薄，甚至可以不用。
    由于暗場(chǎng)熒光顯微木時(shí)，它的背景是黑的，放增強(qiáng)了熒光圖象的亮度和反襯度，這梆，不僅提高了圖象的質(zhì)量、觀察舒適，而員還能觀察出明場(chǎng)觀察時(shí)分辨不出來的細(xì)微頤粒，因此徠卡熒光顯微鏡具有超顯微木的意義。
    （3）相樹熒光聚光它與普通聚光器相同，只是它的透鏡能透過紫外光，如與相襯物鏡配合使用，則可作相襯顯微鏡，也可作徠卡熒光顯微鏡，在同時(shí)有兩個(gè)光源一個(gè)是汞燈作為熒光激發(fā)光一個(gè)是白熾燈作為相襯照明）或者是一個(gè)光源通過適當(dāng)安排分成兩條光路。在這樣的情況T，則可同時(shí)進(jìn)行相襯，熒光聯(lián)合觀鼠既能看到熒光圖象，又能看到相襯圖抵在某些情況T，有助于目標(biāo)的定位和結(jié)果的正確判斷。
徠卡熒光顯微鏡是普通顯微術(shù)的重大發(fā)展。它具有*的*性。徠卡熒光顯微鏡是在黑閱內(nèi)背景下觀察標(biāo)‘杠的形色圖象，有良好的反劉，故觀察清楚、方便，易哥：鑒別，眼睛也不員疲勞。由于徠卡熒光顯微鏡的熒光染色素的濃度極?。▋x1：I ooo00）便能發(fā)出明亮的熒光，因此一般油機(jī)體眾說是無動(dòng)的，為活體觀察，如研究功能器官的過程和細(xì)微糾構(gòu)，某些代謝過程的變化等，提供了廣泛的可能性。另外，徠卡熒光顯微鏡的熒光色素染色法比較簡軋時(shí)間路標(biāo)木制作客只，特別適于快速工億如傳染病的快速診斷等。
  徠卡熒光顯微鏡——反射光熒光裝置
  徠卡熒光顯微鏡對(duì)于觀察透明度差的標(biāo)本，以及各種活體組織時(shí)，需采用反射光熒光裝置。徠卡熒光顯微鏡反射光熒光裝置的特點(diǎn)是：從光源來的混合光射到干涉分光濾鏡后，波長短的部分（榮外和紫藍(lán)）由于濾鏡上鍍膜的性質(zhì)而反射，當(dāng)濾鏡對(duì)向光源呈45。傾斜時(shí)，則垂直射向物鏡，’經(jīng)物鏡射向標(biāo)久使標(biāo)本受到激發(fā)，這時(shí)物鎮(zhèn)直接起看聚光器的作用，同時(shí)波長氏的部分（綠、黃、紅等）能透過濾鏡比因此不向物鏡方向反射，濾鏡起到了激發(fā)濾板的作用，由于標(biāo)本的熒光是處在可見光長波區(qū)；故對(duì)濾鏡也是可以透過的，因此能透射到目鏡以供觀察。根拇所需要激發(fā)光不同，干涉分光濫鏡可以更換。
    徠卡熒光顯微鏡——熒光顯微鏡的持點(diǎn)
    徠卡熒光顯微鏡是普通顯微術(shù)的重大發(fā)展。它具有*的*性。徠卡熒光顯微術(shù)是在黑閱內(nèi)背景下觀察標(biāo)‘杠的形色圖象，有良好的反劉，故觀察清楚、方便，易哥：鑒別，眼睛也不會(huì)疲勞。由于熒光染色素的濃度極稀（儀1：I ooo00）便能發(fā)出明亮的熒光，因此一般油機(jī)體眾說是無動(dòng)的，為活體觀察，如研究功能器官的過程和細(xì)微糾構(gòu)，某些代謝過程的變化等，提供了廣泛的可能性。另外，英光色素染色法比較簡軋時(shí)間路標(biāo)木制作客只，特別適于快速工億如傳染病的快速診斷等。
    徠卡熒光顯微鏡的熒光顯微術(shù)可用明視場(chǎng)改暗視場(chǎng)方洗，但—般用睹權(quán)場(chǎng)效果較好，因?yàn)樗a(chǎn)生的現(xiàn)場(chǎng)背景是黑的，圖象反襯強(qiáng)，過沒有明視場(chǎng)方便。至于透射熒光還是反射熒光，一般來說，反射熒光應(yīng)用范圍廣一以它不僅適用觀察普通標(biāo)刺，而且還能現(xiàn)察不適明標(biāo)本。
    徠卡熒光顯微鏡根據(jù)激發(fā)光波長的特點(diǎn)，熒光顯微術(shù)可用紫外光或紫藍(lán)光激發(fā)。蒙外光的特點(diǎn)在觀察機(jī)體組織的自體熒光＜如核酸及金剛石等）在組織華工d：中便于區(qū)別背景熒光和染色目標(biāo)的熒光。但陜點(diǎn)是：常常會(huì)引起標(biāo)4；熒光的光致淬滅，標(biāo)本難以重復(fù)觀察，并且沙顯微攝影發(fā)生團(tuán)難。另外對(duì)活體標(biāo)本有叨顯的殺傷作用，對(duì)長期從事這項(xiàng)工作人員的暇睛也有傷害。特別是對(duì)絕大多數(shù)的熒光色素來說，紫外區(qū)不是zui大的光譜吸收風(fēng)因而不能得到先分的激發(fā)。而紫藍(lán)光卻沒有以上—些缺點(diǎn)，但不足的是不能激發(fā)組織的自體熒光，因此不適于研究組織的白體熒光結(jié)構(gòu)。
    結(jié)果徠卡熒光顯微鏡所觀察的熒光圖象，主要以兩個(gè)指標(biāo)：劉斷結(jié)果，一是形態(tài)學(xué)特征，二是熒光的亮度。在免疫焚光工作巾，尤其是這樣，必須將兩者結(jié)合起來綜合判斷不可偏皮。糾果記錄是根據(jù)主觀指標(biāo)或客觀指標(biāo)，但一般常是憑工作者日力觀察的主觀指標(biāo)由于這是定性的觀察，所以記錄的度較差。隨著科學(xué)技術(shù)的發(fā)展，采用客觀指標(biāo)記錄結(jié)果已經(jīng)開始應(yīng)用，有以下幾點(diǎn)：
    ①用不同序度的中性濾片插入激發(fā)濾片和標(biāo)本之間的光路中，以看焚光減駒的極度；
    ②不同標(biāo)本以相同的隕光時(shí)間進(jìn)行顯檄攝影，然后用光密度計(jì)測(cè)定膠卷圖象；
    ③直接用熒光計(jì)測(cè)熒光色素和兔疫熒光染色的鏡下標(biāo)本，
    ④用光敏電池漏光表Z；愧網(wǎng)象的亮度，或者與掃描裝置結(jié)備對(duì)視場(chǎng)的特定部位進(jìn)行掃描等，如熒光顯微光度計(jì)。
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