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EMC-500A高速逆流色譜儀
分離鄰二苯酚，間苯二酚流程
一． 儀器條件
1. EMC-500A高速逆流色譜儀
轉(zhuǎn)向：正向（正向定義：見儀器標(biāo)識(shí)）；轉(zhuǎn)速：800轉(zhuǎn)/分鐘
2. 8823B紫外檢測(cè)器
波長(zhǎng)254納米；靈敏度2A
3. EMC-P10泵
流量2毫升/分鐘（壓力保護(hù)值設(shè)定1mpa）
4. 3057記錄儀
紙速：6厘米/小時(shí)；量程：100mv
5. 進(jìn)樣器：2毫升
二． 連接管路
連接順序：溶劑—濾頭—泵入口（下）—泵出口（上）—進(jìn)樣器入口（“接輸液泵”）—進(jìn)樣器出口（“接制備柱”）—主機(jī)管路入口（標(biāo)記端）—主機(jī)管路出口—檢測(cè)器入口（下）—檢測(cè)器出口（上）—收集瓶（初期建議使用100ml量筒，以辨認(rèn)液體分層）
注意：用手?jǐn)Q接頭組件（不提倡使用扳子等工具，以免超負(fù)荷損壞）連接管路完成后，泵入蒸餾水以檢查管路有無液體異常泄露。
三． 溶劑系統(tǒng)：共1000毫升
1. 正己烷/乙酸乙酯/甲醇/水=1/0.8/1/0.8（V/V）（所用溶劑均為分析純）
2. 固定相：上相 流動(dòng)相：下相
3. 樣品：鄰二苯酚（化學(xué)純，市售廠）
4. 間苯二酚（分析純，市售）
四． 操作過程
1. 配制溶劑系統(tǒng)
按正己烷/乙酸乙酯/甲醇/水=1/0.8/10.8（V/V體積比）共1000ml，用量筒至一玻璃容器內(nèi)，脫氣，分層分離。——在實(shí)驗(yàn)開始前1天，將溶劑配置在同一玻璃容器（推薦磨口三角瓶）內(nèi)混合震搖，注意排氣，超聲波脫氣30分鐘后，移液至同一分液漏斗密閉靜置飽和。在實(shí)驗(yàn)開始前1小時(shí)內(nèi)，將兩相溶劑分開放置在兩玻璃容器內(nèi)，并密閉靜置，防止蒸發(fā)。
按正己烷/乙酸乙酯/甲醇/水=1/0.8/10.8（V/V體積比）共1000ml，用量筒至一玻璃容器內(nèi)，脫氣，分層分離。——在實(shí)驗(yàn)開始前1天，將溶劑配置在同一玻璃容器（推薦磨口三角瓶）內(nèi)混合震搖，注意排氣，超聲波脫氣30分鐘后，移液至同一分液漏斗密閉靜置飽和。在實(shí)驗(yàn)開始前1小時(shí)內(nèi)，將兩相溶劑分開放置在兩玻璃容器內(nèi)，并密閉靜置，防止蒸發(fā)。
2. 樣品制備
在一玻璃容器內(nèi)將預(yù)先使用天平稱量的80毫克鄰二苯酚和100毫克間苯二酚混合物溶于3毫升下相中，超聲波脫氣（溶解至溶液內(nèi)無固體，如有固體應(yīng)過濾，以防止塞管路），并密閉靜置，防止蒸發(fā)。
在一玻璃容器內(nèi)將預(yù)先使用天平稱量的80毫克鄰二苯酚和100毫克間苯二酚混合物溶于3毫升下相中，超聲波脫氣（溶解至溶液內(nèi)無固體，如有固體應(yīng)過濾，以防止塞管路），并密閉靜置，防止蒸發(fā)。
3. 連接泵
將泵入口（下）連接的濾頭放入固定相（上相）瓶?jī)?nèi)，*浸入液面以下閉合泵電源開關(guān)，啟動(dòng)泵，設(shè)定壓力保護(hù)值1mpa（兆帕）。按ph鍵。
設(shè)定流量：9.99ml分鐘，按L鍵，按999，使數(shù)字顯示為999，按run鍵。用9.99ml/分鐘流量向主機(jī)內(nèi)泵入固定相（上相），注意管路內(nèi)不要有氣體，至充滿分離柱柱體，，固定相從主機(jī)出口流出5分鐘后，停泵——按PAU鍵。迅速將泵入口（下）連接的濾頭換放入流動(dòng)相（下相）溶劑瓶?jī)?nèi)，*浸入液面以下。注意管路內(nèi)不要有氣體。
將泵入口（下）連接的濾頭放入固定相（上相）瓶?jī)?nèi)，*浸入液面以下閉合泵電源開關(guān)，啟動(dòng)泵，設(shè)定壓力保護(hù)值1mpa（兆帕）。按ph鍵。
設(shè)定流量：9.99ml分鐘，按L鍵，按999，使數(shù)字顯示為999，按run鍵。用9.99ml/分鐘流量向主機(jī)內(nèi)泵入固定相（上相），注意管路內(nèi)不要有氣體，至充滿分離柱柱體，，固定相從主機(jī)出口流出5分鐘后，停泵——按PAU鍵。迅速將泵入口（下）連接的濾頭換放入流動(dòng)相（下相）溶劑瓶?jī)?nèi)，*浸入液面以下。注意管路內(nèi)不要有氣體。
4. 檢查主機(jī)狀態(tài)與管路狀態(tài)。
儀器主機(jī)放置在平穩(wěn)、堅(jiān)實(shí)、安全的水平平面上，儀器地腳與平面間放置厚約3毫米的隔震硬橡膠板，儀器地腳調(diào)實(shí)。環(huán)境：濕度10—30攝氏度，通風(fēng)良好，禁止無關(guān)人員停留與過往。遠(yuǎn)離易燃易爆物品和場(chǎng)所。
打開主機(jī)上蓋，潤(rùn)滑主機(jī)解繞管，加潔凈潤(rùn)滑油3－4滴，輕觸機(jī)內(nèi)運(yùn)動(dòng)部分使其正向旋轉(zhuǎn)3－4圈，以檢查有無異常。無異常，關(guān)蓋鎖緊。
儀器主機(jī)放置在平穩(wěn)、堅(jiān)實(shí)、安全的水平平面上，儀器地腳與平面間放置厚約3毫米的隔震硬橡膠板，儀器地腳調(diào)實(shí)。環(huán)境：濕度10—30攝氏度，通風(fēng)良好，禁止無關(guān)人員停留與過往。遠(yuǎn)離易燃易爆物品和場(chǎng)所。
打開主機(jī)上蓋，潤(rùn)滑主機(jī)解繞管，加潔凈潤(rùn)滑油3－4滴，輕觸機(jī)內(nèi)運(yùn)動(dòng)部分使其正向旋轉(zhuǎn)3－4圈，以檢查有無異常。無異常，關(guān)蓋鎖緊。
5. 調(diào)整紫外檢測(cè)器
詳見紫外檢測(cè)器說明書調(diào)整紫外檢測(cè)器波長(zhǎng)到254nm：（在切斷市電的情況下）解脫紫外檢測(cè)器光源插頭座，旋開光源固定螺母，取出空心陰極燈，用紫外檢測(cè)器工具將擋圈選下，取出（出廠時(shí)已裝上的）280nm濾光片。裝入透紫玻璃，將擋圈旋緊，再將燈放回原處，旋緊光源固定螺母，接好光源插頭座。將波長(zhǎng)轉(zhuǎn)換開關(guān)置于254處。小心安妥保管280nm濾光片，并做標(biāo)記（注：在不使用280nm燈時(shí)，均應(yīng)/可置于254處——衰減大）紫外檢測(cè)器-在逆流色譜儀主機(jī)運(yùn)轉(zhuǎn)開始前40分鐘通電預(yù)熱。
詳見紫外檢測(cè)器說明書調(diào)整紫外檢測(cè)器波長(zhǎng)到254nm：（在切斷市電的情況下）解脫紫外檢測(cè)器光源插頭座，旋開光源固定螺母，取出空心陰極燈，用紫外檢測(cè)器工具將擋圈選下，取出（出廠時(shí)已裝上的）280nm濾光片。裝入透紫玻璃，將擋圈旋緊，再將燈放回原處，旋緊光源固定螺母，接好光源插頭座。將波長(zhǎng)轉(zhuǎn)換開關(guān)置于254處。小心安妥保管280nm濾光片，并做標(biāo)記（注：在不使用280nm燈時(shí)，均應(yīng)/可置于254處——衰減大）紫外檢測(cè)器-在逆流色譜儀主機(jī)運(yùn)轉(zhuǎn)開始前40分鐘通電預(yù)熱。
6. 啟動(dòng)主機(jī)：
將后面板轉(zhuǎn)向開關(guān)置于“正向”處、閉合速度控制其電源開關(guān)：緩慢調(diào)節(jié)多圈電位器旋鈕調(diào)整控制器指針（順時(shí)為加速，逆時(shí)為減速），顯示表指針預(yù)定位置，一般取轉(zhuǎn)速800轉(zhuǎn)/分鐘。
泵入流動(dòng)相：設(shè)定流量：2.0ml/min。按L鍵，按200，使數(shù)字顯示為200，按run鍵。
注意：在泵入流動(dòng)相的全部時(shí)間內(nèi)，要求保證泵入口（下）連接的濾頭始終*進(jìn)入流動(dòng)相（下相）溶劑瓶?jī)?nèi)液面以下。
將后面板轉(zhuǎn)向開關(guān)置于“正向”處、閉合速度控制其電源開關(guān)：緩慢調(diào)節(jié)多圈電位器旋鈕調(diào)整控制器指針（順時(shí)為加速，逆時(shí)為減速），顯示表指針預(yù)定位置，一般取轉(zhuǎn)速800轉(zhuǎn)/分鐘。
泵入流動(dòng)相：設(shè)定流量：2.0ml/min。按L鍵，按200，使數(shù)字顯示為200，按run鍵。
注意：在泵入流動(dòng)相的全部時(shí)間內(nèi)，要求保證泵入口（下）連接的濾頭始終*進(jìn)入流動(dòng)相（下相）溶劑瓶?jī)?nèi)液面以下。
7. 調(diào)整紫外檢測(cè)器靈敏度
閉合紫外檢測(cè)器電源開關(guān)，預(yù)熱完成后，當(dāng)流動(dòng)相進(jìn)入紫外檢測(cè)器吸收池中，將量程范圍調(diào)節(jié)鈕旋至T檔，調(diào)節(jié)透過率調(diào)節(jié)旋鈕，使數(shù)字顯示5（mv）-量程低點(diǎn)。T透過率。A吸收度（透過率負(fù)對(duì)數(shù)），數(shù)值是以A檔為基準(zhǔn)的倍率。紫外檢測(cè)器與記錄儀信號(hào)連線時(shí)應(yīng)紅線對(duì)紅插座，黑線對(duì)黑插座。
閉合紫外檢測(cè)器電源開關(guān)，預(yù)熱完成后，當(dāng)流動(dòng)相進(jìn)入紫外檢測(cè)器吸收池中，將量程范圍調(diào)節(jié)鈕旋至T檔，調(diào)節(jié)透過率調(diào)節(jié)旋鈕，使數(shù)字顯示5（mv）-量程低點(diǎn)。T透過率。A吸收度（透過率負(fù)對(duì)數(shù)），數(shù)值是以A檔為基準(zhǔn)的倍率。紫外檢測(cè)器與記錄儀信號(hào)連線時(shí)應(yīng)紅線對(duì)紅插座，黑線對(duì)黑插座。
8. 閉合記錄儀電源開關(guān)
設(shè)定記錄儀：紙速：6厘米/小時(shí)。量程：100mv。基線，5mv。并放下記錄筆。
設(shè)定記錄儀：紙速：6厘米/小時(shí)。量程：100mv。基線，5mv。并放下記錄筆。
9. 進(jìn)樣（將樣品液體裝進(jìn)到進(jìn)樣器定量管內(nèi)）
調(diào)整進(jìn)樣器狀態(tài)使手柄在“進(jìn)樣”標(biāo)記位。用潔凈針筒針頭吸取全部樣品液體，排除針筒、針筒針頭內(nèi)全部氣體，旋松進(jìn)樣器的“進(jìn)樣器”標(biāo)記處管路口處“？”筒的針頭刺入并連接在進(jìn)樣器的“進(jìn)樣器”標(biāo)記處管路口上。用手旋緊進(jìn)樣器的“進(jìn)樣器”標(biāo)記處管路口處“外六方金屬體”
推進(jìn)針筒內(nèi)全部樣品液體到進(jìn)樣器定量管內(nèi)（使液體從進(jìn)樣器“溢出”標(biāo)記處管路溢出，以便排除管路氣體）。
在樣品進(jìn)入定量管內(nèi)到樣品進(jìn)入柱管前的期間內(nèi)，注意不要使樣品流失。！！
調(diào)整進(jìn)樣器狀態(tài)使手柄在“進(jìn)樣”標(biāo)記位。用潔凈針筒針頭吸取全部樣品液體，排除針筒、針筒針頭內(nèi)全部氣體，旋松進(jìn)樣器的“進(jìn)樣器”標(biāo)記處管路口處“？”筒的針頭刺入并連接在進(jìn)樣器的“進(jìn)樣器”標(biāo)記處管路口上。用手旋緊進(jìn)樣器的“進(jìn)樣器”標(biāo)記處管路口處“外六方金屬體”
推進(jìn)針筒內(nèi)全部樣品液體到進(jìn)樣器定量管內(nèi)（使液體從進(jìn)樣器“溢出”標(biāo)記處管路溢出，以便排除管路氣體）。
在樣品進(jìn)入定量管內(nèi)到樣品進(jìn)入柱管前的期間內(nèi)，注意不要使樣品流失。！！
10. 進(jìn)樣/接柱
在流動(dòng)相從檢測(cè)器出口流出后，將進(jìn)樣器狀態(tài)調(diào)整至“接柱”標(biāo)記——進(jìn)樣：進(jìn)樣器定量管內(nèi)樣品液體接進(jìn)到主機(jī)分離柱管系統(tǒng)內(nèi)。進(jìn)樣后約3小時(shí)第二峰出完。
在1進(jìn)樣同時(shí)，2啟動(dòng)記錄儀走紙按鍵，3放下紀(jì)錄筆，4調(diào)整記錄儀狀態(tài)至走紙，5按回零/測(cè)量按鍵兩次，在記錄紙上做標(biāo)記，并確認(rèn)處于測(cè)量狀態(tài)。6檢查泵運(yùn)行狀態(tài)，確認(rèn)泵出的液體正常流出。7紀(jì)錄實(shí)驗(yàn)各項(xiàng)參數(shù)，時(shí)間，狀態(tài)等。
收集檢測(cè)器出口流出液體。以環(huán)保方式處理和保管廢棄液體。建議：液體暫裝容器采用透明無色玻璃，并適當(dāng)密閉
在流動(dòng)相從檢測(cè)器出口流出后，將進(jìn)樣器狀態(tài)調(diào)整至“接柱”標(biāo)記——進(jìn)樣：進(jìn)樣器定量管內(nèi)樣品液體接進(jìn)到主機(jī)分離柱管系統(tǒng)內(nèi)。進(jìn)樣后約3小時(shí)第二峰出完。
在1進(jìn)樣同時(shí)，2啟動(dòng)記錄儀走紙按鍵，3放下紀(jì)錄筆，4調(diào)整記錄儀狀態(tài)至走紙，5按回零/測(cè)量按鍵兩次，在記錄紙上做標(biāo)記，并確認(rèn)處于測(cè)量狀態(tài)。6檢查泵運(yùn)行狀態(tài)，確認(rèn)泵出的液體正常流出。7紀(jì)錄實(shí)驗(yàn)各項(xiàng)參數(shù)，時(shí)間，狀態(tài)等。
收集檢測(cè)器出口流出液體。以環(huán)保方式處理和保管廢棄液體。建議：液體暫裝容器采用透明無色玻璃，并適當(dāng)密閉
圖 EMC-500A-HSCCC分離間苯二酚和鄰苯二酚的色譜圖
五． 試驗(yàn)結(jié)束
逆時(shí)針調(diào)整多調(diào)速器圈電位器旋鈕歸零，關(guān)斷逆流色譜儀調(diào)速器開關(guān)，主機(jī)運(yùn)轉(zhuǎn)停止。管段記錄儀，紫外檢測(cè)器電源等開關(guān)。因儀器系統(tǒng)能耗不大，建議各儀器市電插頭集中就近插放。
實(shí)驗(yàn)完畢，立即使用5-10kg壓力的潔凈空氣排出逆流色譜儀主機(jī)儀器內(nèi)大部分液體，潔凈空氣由主機(jī)入口（標(biāo)記端）管路接入。然后大流量泵入潔凈液體沖洗儀器內(nèi)殘留液體。沖洗過程中多次斷續(xù)切換進(jìn)樣器狀態(tài)，以沖洗進(jìn)樣器。
主機(jī)內(nèi)殘留液體沖洗完畢，切斷各儀器電源。針頭可留在進(jìn)樣器的“進(jìn)樣器”標(biāo)記處管路口處，將針管脫離取下。
保留逆流色譜儀主機(jī)內(nèi)潔凈液體，待近期下次使用。如近期（1個(gè)月以內(nèi)）不使用逆流色譜儀，需使用潔凈空氣排出逆流色譜儀主機(jī)儀器內(nèi)全部液體，使用壓力0.5-1Mpa,持續(xù)時(shí)間≧40分鐘，保留泵內(nèi)潔凈液體，將泵的液體管路出入口均置于同一容器液體內(nèi)，待近期下次使用。
六． 提示與警告
慎用或禁用：
1． 含有鹽類的液體溶劑系統(tǒng)。
2． 含有易于結(jié)晶、沉淀、粘稠的液體溶劑系統(tǒng)與樣品。——上述溶劑系統(tǒng)極易于阻塞工作管路，造成儀器的*性損壞。
3． 當(dāng)工作鼓內(nèi)缺少液體時(shí)禁止儀器運(yùn)轉(zhuǎn)。
提示：
1. 寒冷的地區(qū)/季節(jié)/室內(nèi)，建議給液體和儀器適當(dāng)溫度，以避免內(nèi)部結(jié)晶。
2. 每一次泵入液體前，務(wù)必檢查/設(shè)定泵的壓力保護(hù)值1Mpa.
3. 變換溶劑系統(tǒng)后，檢查/調(diào)整平衡。出廠時(shí)的配重溶劑系統(tǒng)比重r=1。
4. HSCCC是高速旋轉(zhuǎn)類儀器，請(qǐng)用戶對(duì)操作者給以明確的安全使用指導(dǎo)。
5. 會(huì)影響記錄曲線美觀的因素：在壓力和溫度變化時(shí)，液體和樣品內(nèi)析出的氣體。樣品顏色。
保管：儀器存放于0℃以上的潔凈通風(fēng)室內(nèi)。
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