產(chǎn)品介紹

DAPI，也稱DAPI dihydrochloride，是一種常用的核酸染料，和EB(ethidium bromide)相比，DAPI對(duì)雙鏈DNA的染色靈敏度要高很多倍。盡管DAPI不能通過(guò)活細(xì)胞膜，但可以通過(guò)提高濃度使之進(jìn)入活細(xì)胞。DAPI具有很高的光漂白承受水平，能用來(lái)檢測(cè)酵母線粒體DNA，葉綠體DNA，病毒DNA，Microplasm DNA以及染色體DNA。

技術(shù)原理

DAPI可以和雙鏈DNA富含AT序列的小溝結(jié)合，產(chǎn)生比自身強(qiáng)20多倍的藍(lán)色熒光。DAPI也可對(duì)RNA進(jìn)行染色，染色機(jī)理是其可以選擇性嵌入“AU序列”并發(fā)出熒光。相比DAPI-dsDNA（Ex/Em=358 nm/461 nm），DAPI-RNA具有較長(zhǎng)的最大發(fā)射波長(zhǎng)（500 nm），其熒光亮度僅有DAPI-dsDNA的20%。

運(yùn)輸與保存方法

冰袋運(yùn)輸，5 mg/mL的DAPI儲(chǔ)存液于-20oC避光保存，1年有效。

使用方法

1、用雙蒸水或PBS稀釋母液，配制成所需要的工作的濃度（0.5-10 μg/mL）。

2、對(duì)于固定的細(xì)胞或組織樣品，固定后，適當(dāng)洗滌去除固定劑。DAPI染色通常在其他染色的最后進(jìn)行。如果不需要進(jìn)行其它染色，則直接進(jìn)行DAPI 染色。

3、細(xì)胞培養(yǎng)物中加入適量DAPI染色液，約1/10細(xì)胞培養(yǎng)基體積，必須充分覆蓋住待染色的樣品。通常對(duì)于六孔板一個(gè)孔需加入1 mL染色液，對(duì)于96孔板一個(gè)孔需加入100 μL染色液。 

4、在37℃培養(yǎng)細(xì)胞 10～20 分鐘。

5、用 PBS或合適的緩沖液洗細(xì)胞兩次。

6、直接在熒光顯微鏡下觀察或封片后熒光顯微鏡下觀察。激發(fā)波長(zhǎng)360 nm，發(fā)射波長(zhǎng)460 nm。

不同DAPI染色的結(jié)果

注意事項(xiàng)

1）DAPI對(duì)人體有一定刺激性，請(qǐng)注意適當(dāng)防護(hù)。

2）熒光染料都存在淬滅的問(wèn)題，建議染色后盡量當(dāng)天完成檢測(cè)。

3）為減緩熒光淬滅可以使用抗熒光淬滅封片液。

4）低濃度的DAPI不容易穿透細(xì)胞膜。

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