一、AAV的定義
AAV是一種單鏈DNA缺陷型病毒,屬于微小病毒科。其基因組DNA小于5kb,無包膜,外形為裸露的二十面體顆粒。AAV不能獨(dú)立復(fù)制,只有在輔助病毒(如腺病毒、單純皰疹病毒等)存在時(shí),才能進(jìn)行復(fù)制和溶細(xì)胞性感染。AAV的基因組兩端為末端反向重復(fù)序列(ITR),中間基因組編碼兩個(gè)主要蛋白:Cap(衣殼蛋白)和Rep(復(fù)制白)。ITR對于病毒的復(fù)制和包裝具有決定性作用。
二、AAV的生產(chǎn)方法
AAV的生產(chǎn)工藝通常涉及多個(gè)步驟,包括質(zhì)粒構(gòu)建、細(xì)胞培養(yǎng)、病毒包裝、收集和純化等。以下是AAV生產(chǎn)的一般流程圖:
質(zhì)粒構(gòu)建:設(shè)計(jì)并合成包含目的基因的載體質(zhì)粒(Transfer plasmid),同時(shí)準(zhǔn)備包裝質(zhì)粒(Packaging plasmid)和包膜質(zhì)粒(Envelope plasmid)。
細(xì)胞培養(yǎng):選擇適合的細(xì)胞系(如HEK293T細(xì)胞)進(jìn)行培養(yǎng),并在無菌條件下添加適當(dāng)?shù)目股匾苑乐辜?xì)菌污染。
轉(zhuǎn)染:將三種質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染到細(xì)胞中,常用轉(zhuǎn)染試劑包括PEI、脂質(zhì)體等,以提高轉(zhuǎn)染效率。
病毒包裝:轉(zhuǎn)染后,細(xì)胞內(nèi)開始產(chǎn)生AAV顆粒,經(jīng)過一定時(shí)間(通常48-72小時(shí)),病毒顆粒釋放到培養(yǎng)基中。
病毒收集與純化:從培養(yǎng)基中收集病毒顆粒,通過離心或過濾去除細(xì)胞殘骸。使用超速離心、親和層析等方法對病毒顆粒進(jìn)行純化,以提高病毒的純度和滴度。
滴度測定:使用qPCR、ELISA等方法測定AAV的滴度,評估病毒的感染能力。
儲(chǔ)存:將純化后的AAV顆粒分裝并儲(chǔ)存于適當(dāng)條件下(通常是-80°C),以備后續(xù)實(shí)驗(yàn)或臨床應(yīng)用。
三、AAV的應(yīng)用
基因治療:AAV作為基因治療載體,廣泛應(yīng)用于多種遺傳性疾病的治療。例如,F(xiàn)DA已批準(zhǔn)使用AAV2載體治療RPE65相關(guān)視網(wǎng)膜營養(yǎng)不良(LUXTURNA)和使用AAV9載體治療脊髓性肌肉萎-縮癥(ZOLGENSMA)。AAV載體能夠高效地將治療性基因傳遞到患者細(xì)胞中,實(shí)現(xiàn)長-期穩(wěn)定的基因表達(dá)。
基因傳遞與功能研究:AAV可用于將外源基因引入體外培養(yǎng)的細(xì)胞中,用于研究基因功能、基因調(diào)控等問題。這種技術(shù)在科學(xué)研究中是一種常見的工具,有助于深入了解基因與疾病之間的關(guān)系。
免疫治療:AAV還可用于免疫治療,通過引入特定的免疫基因來增強(qiáng)機(jī)體的免疫力,對抗某些類型的癌癥或感染。例如,AAV載體可以攜帶免疫刺激分子或腫瘤相關(guān)抗原的基因,誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生特異性免疫反應(yīng)。
基因編輯:AAV病毒還可以作為基因編輯工具的運(yùn)載體,如將CRISPR-Cas9系統(tǒng)引入細(xì)胞中,實(shí)現(xiàn)對基因組的精確編輯。這種技術(shù)在遺傳性疾病治療、癌癥治療等領(lǐng)域具有廣闊的應(yīng)用前景。
針對以上技術(shù)資訊內(nèi)容,如果您有不太清楚或者想了解更多信息(包括基本信息/技術(shù)資料/解決方案),都可以隨時(shí)咨詢上海恒遠(yuǎn)生物科技有限公司業(yè)務(wù)員。我司力于提供生命科學(xué)領(lǐng)域的技術(shù)服務(wù),提供實(shí)驗(yàn)技術(shù)服務(wù),為廣大科研工作者大大節(jié)省了重復(fù)勞動(dòng)的時(shí)間和精力,我們有過硬的技術(shù)咨詢和完善的售后服務(wù),為您解決后顧之憂。
相關(guān)產(chǎn)品
免責(zé)聲明
- 凡本網(wǎng)注明“來源:化工儀器網(wǎng)”的所有作品,均為浙江興旺寶明通網(wǎng)絡(luò)有限公司-化工儀器網(wǎng)合法擁有版權(quán)或有權(quán)使用的作品,未經(jīng)本網(wǎng)授權(quán)不得轉(zhuǎn)載、摘編或利用其它方式使用上述作品。已經(jīng)本網(wǎng)授權(quán)使用作品的,應(yīng)在授權(quán)范圍內(nèi)使用,并注明“來源:化工儀器網(wǎng)”。違反上述聲明者,本網(wǎng)將追究其相關(guān)法律責(zé)任。
- 本網(wǎng)轉(zhuǎn)載并注明自其他來源(非化工儀器網(wǎng))的作品,目的在于傳遞更多信息,并不代表本網(wǎng)贊同其觀點(diǎn)和對其真實(shí)性負(fù)責(zé),不承擔(dān)此類作品侵權(quán)行為的直接責(zé)任及連帶責(zé)任。其他媒體、網(wǎng)站或個(gè)人從本網(wǎng)轉(zhuǎn)載時(shí),必須保留本網(wǎng)注明的作品第一來源,并自負(fù)版權(quán)等法律責(zé)任。
- 如涉及作品內(nèi)容、版權(quán)等問題,請?jiān)谧髌钒l(fā)表之日起一周內(nèi)與本網(wǎng)聯(lián)系,否則視為放棄相關(guān)權(quán)利。