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          嘔吐毒素檢測如何完成酶聯(lián)免疫試驗

          來源:上海研尊生物科技有限公司   2024年10月25日 09:34  
          脫氧雪腐鐮刀菌烯醇又稱嘔吐毒素,由禾谷鐮刀菌產(chǎn)生,常出現(xiàn)在玉米(穗腐病)、小麥和大麥(赤霉病)上。我國谷物中DON的標準為1.0mg/kg。
          本試劑盒采用間接競爭ELISA方法檢測大米、小米、面等谷物及飼料樣本中的嘔吐毒素(Deoxynivalenol,DON),試劑盒由預包被偶聯(lián)抗原的酶標板、辣根酶標記物、抗體、標準品及其他配套試劑組成。檢測時,加入標準品或樣本溶液,樣本中的嘔吐毒素和酶標板上預包被偶聯(lián)抗原競爭抗嘔吐毒素抗體,加入酶標記物后,用TMB底物顯色,樣本吸光度值與其所含嘔吐毒素含量成負相關,與標準曲線比較即可得出樣本中嘔吐毒素的殘留量。
          酶聯(lián)免疫試驗步驟:
          將所需試劑從4℃冷藏環(huán)境中取出,置于室溫平衡30min以上,洗滌液冷藏時可能會有結(jié)晶需恢復到室溫以充分溶解,每種液體試劑使用前均須搖勻。取出需要數(shù)量的微孔板及框架,將不用的微孔板放入自封袋,保存于2-8℃
          1、編號:將樣本和標準品對應微孔按序編號,每個樣本和標準品做2孔平行,并記錄標準孔和樣本孔所在的位置
          2、加樣反應:加標準品或樣本50µl/孔到各自的微孔中,然后加酶標記物50µl/孔,再加入50µl/孔的抗體工作液,用蓋板膜封板,輕輕振蕩5秒混勻,25℃反應30分鐘
          3、洗滌:小心揭開蓋板膜,甩去孔內(nèi)液體,每孔加350µl工作洗滌液,靜置30秒后棄去,重復洗滌5次,最后一次拍干(用吸水紙拍干,拍干后未被清除的氣泡可用干凈的槍頭刺破)
          4、顯色:每孔加入底物液A50µl,再加底物液B50µl,輕輕振蕩5秒混勻,25℃避光顯色15分鐘(若藍色過淺,可適當延長反應時間)
          5、終止:每孔加入終止液50µl,輕輕振蕩混勻,終止反應
          6、測吸光值:用酶標儀于450nm處測定每孔吸光度值(建議用雙波長450/630nm)。測定應在終止反應后10分鐘內(nèi)完成

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