1 標(biāo)準(zhǔn)菌株的復(fù)活

    標(biāo)準(zhǔn)菌株一般為安培裝凍干粉劑，依照隨產(chǎn)品附有的菌種復(fù)活方法，以及《人間傳 購回的標(biāo)準(zhǔn)菌株 標(biāo)準(zhǔn)菌株 染病微生物分類目錄》和《實(shí)驗(yàn)室生物安全通用要求》，在相應(yīng)的生物安全水平下，開啟包裝。用 75%酒精棉球擦拭安培瓶上部，可用砂輪或銼刀在安培瓶上部劃一小痕跡，用無 菌紗布包住安培瓶，兩手分別捏住安培瓶上下兩端，稍向外用力便可打開安培瓶。 依據(jù)菌株特性選擇合適的培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件，用無菌吸管吸適量的液體培養(yǎng)基加到凍干塊 上，吹打混勻成懸液，將全部懸液移入含有 5ml 合適的液體培養(yǎng)基中，將管中殘留的幾滴懸 液移種到斜面上，適宜的溫度培養(yǎng)一定的時(shí)間。觀察生長(zhǎng)狀況，可適當(dāng)延長(zhǎng)培養(yǎng)時(shí)間。

2 菌株的性能確認(rèn)

2.1 純度檢查 菌落形態(tài) 取復(fù)活后的培養(yǎng)物， 在相應(yīng)的鑒別平板或非選擇平板上劃線分離， 培養(yǎng)出單菌落， 觀察菌落形態(tài)是否符合該菌株要求，同一平板上的單菌落大小，形狀、顏色、質(zhì)地、光澤是 否相似， 對(duì)于出現(xiàn)兩種以上形態(tài)的菌株， 應(yīng)再分別挑取單菌落劃線， 檢測(cè)是否出現(xiàn)相同特征。

2.2 細(xì)胞形態(tài) 取劃線平板上的單菌落，革蘭氏染色反應(yīng)應(yīng)符合要求，且呈現(xiàn)一致性。

2.3 生化鑒定 必要時(shí)進(jìn)行生化鑒定

2.4 污染處理 如發(fā)現(xiàn)菌株有污染， 挑選目標(biāo)菌培養(yǎng)成功后， 將培養(yǎng)物滅菌銷毀 （121℃30min）

3 菌株的傳代

3.1 標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備菌株的制備 標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備菌株是在經(jīng)多次傳代后制備的多份相同的菌株。 將復(fù)活后經(jīng)過性能確認(rèn)的菌株的斜面培養(yǎng)物，用 0.85%的滅菌生理鹽水 0.5ml 洗斜面菌苔成 菌懸液 將上述菌懸液吸入滅菌管中，加入 0.5ml40%的滅菌甘油，混勻，密封。保藏溫度為—18℃

3.2 工作菌株的制備 由凍干或超低溫保存的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備菌株經(jīng)一次傳代得到的菌株。 工作菌株不宜再傳代， 工作菌 株使用和儲(chǔ)存過程中嚴(yán)格遵守?zé)o菌操作，即不存在交叉污染，可以多次使用。保藏溫度為 4-6℃

3.3 制備好的菌株應(yīng)由室主任統(tǒng)一編號(hào)，標(biāo)識(shí)，專人專柜保藏。