在生物醫(yī)學(xué)研究和治療領(lǐng)域，單克隆抗體（mAbs）扮演著越來(lái)越重要的角色。特別是在癌癥和慢性疾病的治療中，抗體的親和力——即其與目標(biāo)抗原結(jié)合的緊密程度，直接影響抗體藥物的治療效果。因此，開發(fā)一種既準(zhǔn)確又可靠的抗體親和力測(cè)定方法，對(duì)于提高治療效率和開發(fā)新型抗體藥物至關(guān)重要。

傳統(tǒng)的親和力測(cè)定技術(shù)

目前存在多種測(cè)定抗體親和力的方法，如放射免疫分析、表面等離子共振（SPR）、流式細(xì)胞術(shù)、酶聯(lián)免疫吸附分析和動(dòng)力學(xué)排阻分析等。作為一種成功的候選治療藥物，mAbs必須能識(shí)別目標(biāo)抗原上的天然表位，因此需要一種更加快速靈敏、直觀簡(jiǎn)便的測(cè)定方法。

基于細(xì)胞的熒光法：一種新的檢測(cè)技術(shù)

Yu等人在杜克大學(xué)醫(yī)學(xué)中心的研究中，開發(fā)了一種基于細(xì)胞的熒光檢測(cè)法（如基于細(xì)胞的ELISA法），用于測(cè)定抗體親和力。這種方法通過(guò)使用熒光標(biāo)記的抗體，并將其加入到固定在96孔板上的抗原陽(yáng)性和抗原陰性的細(xì)胞系中，通過(guò)計(jì)算特異性結(jié)合和非特異性結(jié)合的差值來(lái)測(cè)量抗體的親和力。

研究者通過(guò)與傳統(tǒng)的流式細(xì)胞術(shù)和放射性（I125）Scatchard分析方法進(jìn)行比較，驗(yàn)證了基于細(xì)胞的熒光法的有效性。結(jié)果顯示，新方法得到的解離常數(shù)KD值與傳統(tǒng)方法相當(dāng)，證明了這一新技術(shù)的準(zhǔn)確性和可靠性。

此外，研究還展示了如何使用這種熒光法進(jìn)行競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合分析，進(jìn)一步驗(yàn)證了抗體與抗原的特異性結(jié)合。這一功能對(duì)于研究抗體的結(jié)合表位和選擇高親和力抗體具有重要意義。

基于細(xì)胞的熒光法的優(yōu)勢(shì)

與流式細(xì)胞術(shù)和I125比色法等傳統(tǒng)方法相比，基于細(xì)胞的熒光法具有多項(xiàng)優(yōu)勢(shì)。首先，該方法不使用放射性同位素，減少了實(shí)驗(yàn)的安全風(fēng)險(xiǎn)。其次，使用完整的細(xì)胞而非純化的蛋白質(zhì)，能夠更真實(shí)地模擬抗體與天然抗原的相互作用。此外，該方法操作簡(jiǎn)便，成本低廉，適合高通量篩選，且能夠在短時(shí)間內(nèi)完成大量樣本的分析。

盡管基于細(xì)胞的熒光法具有諸多優(yōu)勢(shì)，但也存在一些局限性。例如，對(duì)于復(fù)雜樣品的處理可能會(huì)產(chǎn)生非特異性結(jié)合，導(dǎo)致結(jié)果的誤判。然而，隨著技術(shù)的不斷優(yōu)化和發(fā)展，這些問(wèn)題有望得到解決。盡管目前還未有人利用基于細(xì)胞的熒光法來(lái)評(píng)估抗體親和力，但是其自身具備的優(yōu)勢(shì)表明該方法具有作為抗體親和力檢測(cè)方法的潛力，為抗體藥物的開發(fā)和研究提供強(qiáng)有力的支持。

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參考文獻(xiàn)：

Yu X, Pegram CN, Bigner DD, Chandramohan V. Development and validation of a cell-based fluorescent method for measuring antibody affinity. J Immunol Methods. 2017;442:49-53. doi:10.1016/j.jim.2016.12.004