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abcam抗體保存指南
保存溫度和條件
對(duì)于我們的很多抗體而言，分裝成小等份并凍存于 -20oC 或 -80oC 是*保存條件。分裝成小等份可zui大程度減少由凍融造成的損傷，以及從單個(gè)試劑瓶中多次吸取而引入的污染。小等份只需凍融一次，如有剩余，可將剩余物保存于 4oC. 在收到抗體時(shí)，在 10,000 × g 下離心 20 秒以沉積截留于試劑瓶螺紋的溶液，并以小等份轉(zhuǎn)移至低蛋白結(jié)合微量離心管中。小等份的量取決于實(shí)驗(yàn)人員在實(shí)驗(yàn)中通常采用的量。小等份應(yīng)不小于10 µl; 等份越小，儲(chǔ)液濃度因抗體蒸發(fā)及吸附于保存瓶表面而受到的影響越大。
在大多數(shù)情況下，收到抗體時(shí)在 4oC 下保存一至兩周，然后再冷凍進(jìn)行長(zhǎng)期保存是可接受的，但也許腹水液是例外，它可能包含蛋白酶，因而應(yīng)該盡快凍存。同樣，遵照數(shù)據(jù)表上的建議是重要的。
免責(zé)條款和其它特別條件：
- 酶偶聯(lián)抗體不應(yīng)凍存，而應(yīng)保存于 4oC. 凍融不僅影響抗體結(jié)合能力，還會(huì)降低酶活性。
- 無論偶聯(lián)至熒光染料、酶還是生物素，偶聯(lián)抗體都應(yīng)保存于深色試劑瓶中或用金屬箔包裹. 暴露于光線中將損害偶聯(lián)物的活性。特別是熒光偶聯(lián)物易受到光漂白影響，在實(shí)驗(yàn)的所有階段都應(yīng)避光。
- IgG 同型抗體3 具有解凍時(shí)形成聚集物的*趨勢(shì)，應(yīng)始終保存于 4oC.
用*防止污染
為了防止微生物污染，可將*加入抗體制備品中達(dá)到0.02% （w/v）. 的終濃度。很多 Abcam 抗體已經(jīng)包含這種防腐劑抗體已經(jīng)包含這種防腐劑，所用濃度范圍為 0.02 至 0.05%。這會(huì)標(biāo)示在數(shù)據(jù)表上標(biāo)題為“保存緩沖液”的欄目。
不使用*的情形：
- 如果用抗體染色或處理活細(xì)胞，或如果用抗體進(jìn)行體內(nèi)研究，一定要使用不包含*的制備品。該抗菌劑也對(duì)大多數(shù)其它生物具有毒性：它阻斷細(xì)胞色素電子傳遞系統(tǒng)。
- *會(huì)干擾氨基參與的任何偶聯(lián)，應(yīng)在偶聯(lián)進(jìn)行前除去。偶聯(lián)后，抗體可保存于*中，除此以外，0.01% 硫汞撒（硫柳汞）不含伯胺，也是可接受的替代物。
| *可通過透析或凝膠過濾從抗體溶液中除去。IgG 的分子量為 150,000 道爾頓（IgM 為約 600,000）；*的分子量為 65 道爾頓。截留分子量為 14,000 道爾頓的微透析裝置可保留抗體同時(shí)使疊氮化物向外擴(kuò)散。在保持于 4oC 的磁性攪拌器上的燒杯中，每毫升抗體使用至少一升冷 PBS 并攪拌透析裝置 6 小時(shí)。更換 PBS 兩次，每次更換攪拌至少 6 小時(shí)。如有可能，所有材料都應(yīng)滅菌并且所得的制備物應(yīng)無菌操作。 |
冷凍/融化損傷
重復(fù)冷凍/融化循環(huán)可使抗體變性，導(dǎo)致其形成使抗體結(jié)合能力降低的聚集物。
保存于 -20oC 對(duì)于大多數(shù)抗體是適當(dāng)?shù)?；保存?-80oC 無明顯優(yōu)勢(shì)。冰箱不能為無霜型。 這些冷凍和融化之間的循環(huán)（以減少結(jié)霜）恰恰是應(yīng)該避免的。出于相同原因，抗體試劑瓶應(yīng)置于具有zui小溫度波動(dòng)的冰箱區(qū)域，例如朝冰箱后部放置而不是置于門架上。
有些研究人員加入冷凍保護(hù)劑甘油達(dá)到 50% 的終濃度以防止冷凍/融化損傷；甘油可將凝固點(diǎn)降低至低于 -20oC。雖然這對(duì)于很多抗體是可接受的，但是只有一小部分我們提供的抗體測(cè)試了在該保存條件下的穩(wěn)定性，并且我們的保證僅適用于按數(shù)據(jù)表上推薦的方式保存的抗體。不建議將包含甘油的溶液保存于 -80oC，因?yàn)樵摐囟鹊陀诟视偷哪厅c(diǎn)。請(qǐng)注意甘油可被細(xì)菌污染。如果加入甘油或任何冷凍保護(hù)劑，則應(yīng)當(dāng)小心操作，以得到無菌制備物。
應(yīng)避免抗體在稀釋至工作濃度后在 4℃ 下保存超過一天。蛋白質(zhì)在高濃度下保存時(shí)一般不易降解，理想的濃度為 1 mg/ml 或更高。這是在抗體溶液中加入蛋白質(zhì)例如 BSA 作為穩(wěn)定劑的理論基礎(chǔ)。加入的蛋白質(zhì)也有助于減少抗體因結(jié)合于容器壁上而造成的損失。對(duì)于打算進(jìn)行偶聯(lián)的抗體而言，由于穩(wěn)定蛋白質(zhì)會(huì)與抗體競(jìng)爭(zhēng)，降低了偶聯(lián)的效率，所以不應(yīng)加入穩(wěn)定蛋白質(zhì)
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