Incucyte® 實(shí)時(shí)活細(xì)胞分析系統(tǒng)是一款革命性的細(xì)胞成像設(shè)備，可以實(shí)現(xiàn)在培養(yǎng)箱內(nèi)無限時(shí)間的連續(xù)觀察。用戶友好的實(shí)驗(yàn)設(shè)置和分析，以及精準(zhǔn)的各種細(xì)胞指標(biāo)計(jì)算，使得許多用戶對(duì)它青睞有加。

Incucyte® 在細(xì)胞水平的體外實(shí)驗(yàn)中有著廣泛應(yīng)用。話不多說，讓我們用文章數(shù)量發(fā)話！

去除預(yù)印版，在2023年第三季度，陳老師收集到了國內(nèi)近30個(gè)不同單位發(fā)表的40余篇文章，匯總?cè)缦拢ㄎ墨I(xiàn)列表在文末哦）。

表1. 2023 Q3 Incucyte® 發(fā)表文章第一作者單位分布

從文章的發(fā)表單位來看，許多單位發(fā)表了多篇文章，如：中山大學(xué)附屬第六醫(yī)院、復(fù)旦大學(xué)醫(yī)學(xué)院、四川大學(xué)華西醫(yī)院、北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院等。利用Incucyte®，可以高效地獲取實(shí)時(shí)細(xì)胞信息，快速得到可信的研究成果。值得一提的是，中山大學(xué)附屬第六醫(yī)院僅在一個(gè)季度，就發(fā)了7篇文章！這足以說明Incucyte® 因其簡單易用、可在短時(shí)間內(nèi)生成多個(gè)精確數(shù)據(jù)的優(yōu)點(diǎn)，已然成為發(fā)表高分文章的利器！

Incucyte® 的應(yīng)用范圍非常廣泛。從第三季度發(fā)表的文章上來看，除了傳統(tǒng)的細(xì)胞增殖活性和劃痕遷移實(shí)驗(yàn)外，還包括血管生成等多種應(yīng)用。與上半年相比，使用Incucyte® 發(fā)表的文章數(shù)量呈現(xiàn)有穩(wěn)步增長的趨勢。

今天，陳老濕就挑選幾篇帶有新應(yīng)用
國內(nèi)文章進(jìn)行介紹：

復(fù)旦大學(xué) 劃痕實(shí)驗(yàn)基因篩選^[1]

^{表觀遺傳調(diào)節(jié)因子（ERF）的失調(diào)在腫瘤的進(jìn)展中起著重要作用。為了確定哪種ERF有助于抑制結(jié)直腸癌（CRC）中的腫瘤細(xì)胞增殖或遷移，研究人員使用siRNA敲低了HT29細(xì)胞中的591種ERF基因，然后使用Incucyte® 高通量實(shí)時(shí)活細(xì)胞成像系統(tǒng)進(jìn)行傷口愈合測定，以檢查腫瘤細(xì)胞的遷移能力。在這些ERF中，針對(duì)AF9的四個(gè)獨(dú)立的siRNA敲低AF9表達(dá)顯著促進(jìn)了傷口愈合的能力。鋅指轉(zhuǎn)錄因子蛋白（SNAIL）被用作該篩選系統(tǒng)中的陽性對(duì)照。AF9在CRC中表現(xiàn)出下調(diào)，并與CRC患者的生存期延長呈正相關(guān)。體外和體內(nèi)測定證明，AF9的消耗可以促進(jìn)細(xì)胞增殖、遷移以及糖酵解。腸上皮細(xì)胞中MLLT3（AF9）的敲除顯著增加了嘧啶甲烷-葡聚糖硫酸鈉（AOM / DSS）誘導(dǎo)的腫瘤形成。}

591個(gè)基因，每個(gè)基因4種siRNA，還有復(fù)孔!一塊96孔板檢測6個(gè)基因，一共需要100塊96孔板，使用Incucyte® 一次性可以掃描6塊板并提供劃痕工具，還能迅速對(duì)劃痕平均距離等進(jìn)行計(jì)算，這大大提高可劃痕測試通量。

華僑大學(xué) 病毒侵染測定^[2]

^{重組腺相關(guān)病毒（rAAV）是基因治療體內(nèi)遞送中具有吸引力的載體，但其對(duì)細(xì)胞和組織的特異性限制了其在臨床上的應(yīng)用。表皮生長因子受體-蛋白酪氨酸激酶（EGFR-PTK）能夠負(fù)調(diào)節(jié)rAAV轉(zhuǎn)導(dǎo)，使得EGFR陽性細(xì)胞幾乎不允許rAAV轉(zhuǎn)導(dǎo)。本研究構(gòu)建了一種新型的rAAV-miRNA133b載體，該載體共表達(dá)miRNA133b（可敲低EGFR表達(dá)）和轉(zhuǎn)基因，并研究了其在體內(nèi)和體外的轉(zhuǎn)導(dǎo)效率。通過使用Incucyte® 活細(xì)胞成像等方法，分析了miRNA133b對(duì)rAAV2轉(zhuǎn)導(dǎo)的影響及其機(jī)制。結(jié)果表明，miRNA133b可促進(jìn)rAAV2轉(zhuǎn)導(dǎo)，且影響僅限于EGFR陽性細(xì)胞。而ss-rAAV2-Fluc-miRNA133b展現(xiàn)出了抗腫瘤作用。rAAV-miRNA133b載體可能成為一種有前景的平臺(tái)，用于遞送各種轉(zhuǎn)基因以治療EGFR陽性細(xì)胞相關(guān)疾病（如非小細(xì)胞肺癌等）。}

相比于流式方法，Incucyte® 無需進(jìn)行消化細(xì)胞等預(yù)處理步驟；而與其他成像設(shè)備相比，它的操作簡單易用，并且能夠進(jìn)行AI輔助分析。

中國科學(xué)院國家生物信息中心  血管生成^[3]

^{由于衰老的復(fù)雜性，我們的實(shí)際生物年齡并不總是與實(shí)際年齡一致，因此開發(fā)能準(zhǔn)確評(píng)估衰老的工具顯得尤為重要。中國科學(xué)院國家生物信息中心劉光慧團(tuán)隊(duì)建立了一個(gè)女性衰老時(shí)鐘，該時(shí)鐘包括了與免疫、脂質(zhì)代謝、激素調(diào)節(jié)和組織健康相關(guān)的多組學(xué)水平的年齡相關(guān)特征。他們將30多歲到50多歲確定為女性老齡化的過渡期，認(rèn)為這是監(jiān)測衰老的重要時(shí)期。研究人員還發(fā)現(xiàn)，激素替代療法可以部分延緩幾個(gè)衰老時(shí)鐘的步伐，并緩解多種與衰老相關(guān)的標(biāo)志物。在這項(xiàng)研究中，Incucyte® 主要用于檢測一些物質(zhì)對(duì)主動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞(Human Aortic Endothelial Cells)的血管生成能力。}

^圖5. Incucyte® 的血管生成實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)：一些非激素類物質(zhì)（肉豆蔻酸等）能增強(qiáng)血管生成能力

^{Incucyte® 有專門的血管生成分析模塊哦！}

^{中山大學(xué)癌癥中心 細(xì)胞共培養(yǎng)競爭模型測定[4]}

^{在細(xì)胞轉(zhuǎn)染后，建立轉(zhuǎn)染細(xì)胞與未轉(zhuǎn)染細(xì)胞的競爭生長模型對(duì)于衡量轉(zhuǎn)染細(xì)胞的生長增殖能力至關(guān)重要。這篇文章中引入了一種新的方法，稱為競爭性增殖測量（ComProliM），以準(zhǔn)確量化細(xì)胞生長速率。該方法涉及共培養(yǎng)兩種不同類型的細(xì)胞，并定義了一個(gè)關(guān)鍵參數(shù)，即 ComProliM 指數(shù) （CPMI）。CPMI 是兩種細(xì)胞數(shù)量比例對(duì)數(shù)和兩種細(xì)胞數(shù)量總數(shù)對(duì)數(shù)進(jìn)行線性回歸的斜率。利用Incucyte® 設(shè)備，我們可以輕松實(shí)現(xiàn)這種檢測。每隔4個(gè)小時(shí)，我們測定兩種貼壁細(xì)胞（分別帶有紅色和綠色熒光）的數(shù)量（熒光面積），以同時(shí)判定兩種細(xì)胞的增殖。然后，我們使用每個(gè)時(shí)間點(diǎn)的兩種細(xì)胞數(shù)的比值的對(duì)數(shù)和兩種細(xì)胞總量進(jìn)行線性回歸，從而計(jì)算CPMI。}

文中提到，相比于MTT、流式等終點(diǎn)法，Incucyte® 的方法具有通量高、操作簡單、可以在短時(shí)間內(nèi)獲得大量數(shù)據(jù)的優(yōu)點(diǎn)。

^{為什么Incucyte® 如此受歡迎呢？}

• 培養(yǎng)箱內(nèi)無限時(shí)間的連續(xù)觀察，最短幾分鐘間隔拍攝，減少人力，防止過多操作對(duì)細(xì)胞的傷害

• 6個(gè)板位，分別獨(dú)立設(shè)置檢測程序，可以兼容各種孔板和培養(yǎng)皿，通量高；比如第一篇和第四篇文章就用到了Incucyte® 的高通量優(yōu)勢

• 高效簡便的模塊化軟件設(shè)置和數(shù)據(jù)分析，輸出圖片、視頻、生長曲線等多指標(biāo)多參數(shù)

• > 100種優(yōu)化過的配套熒光試劑和耗材及詳盡的protocol

總而言之，您只管放好細(xì)胞，剩下的就交給Incucyte® 吧！