實(shí)驗(yàn)簡介
PD-1,全稱為“程序性死亡受體1”,又稱為CD279,是一種重要的免疫抑制分子。PD-1主要功能是下調(diào)免疫系統(tǒng)對人體細(xì)胞的反應(yīng)、抑制T細(xì)胞炎癥活動(dòng),調(diào)節(jié)免疫系統(tǒng)并促進(jìn)自身耐受。PD-1發(fā)揮功能可以預(yù)防自身免疫性疾病,但也會(huì)阻止免疫系統(tǒng)攻擊癌細(xì)胞,造成腫瘤進(jìn)展。通過流式細(xì)胞技術(shù)檢測PD-1表達(dá),可以反映腫瘤進(jìn)展情況。多項(xiàng)研究顯示,PD-1在腫瘤患者的外周血CD8+T細(xì)胞表面過表達(dá),并與患者的病理變化及臨床療效密切相關(guān)。CD8+PD-1+T 細(xì)胞在癌患者外周中的比例明顯增加,且晚期患者的CD8+PD-1+ T細(xì)胞水平高于早期癌患者,由此提示PD-1分子在癌患者外周血CD8+ T 細(xì)胞中的應(yīng)答水平發(fā)生改變,并與患者疾病的進(jìn)展密切相關(guān)。
實(shí)驗(yàn)材料與方法
檢測方法:
樣本制備:
1. 消化酶制備單細(xì)胞懸液,并過濾;
2. 裂解紅細(xì)胞,1 mL 1X RBC裂解紅細(xì)胞,室溫10 min(根據(jù)廠家推薦);
3. 清洗:加入1 ml染色緩沖液,350g,離心5 min,棄上清;
4.可重復(fù)步驟3;
5. 染色:根據(jù)廠家推薦用量進(jìn)行染色,室溫避光孵育20 min;
6. 清洗:加入1 ml染色緩沖液,350g,離心5 min,棄上清;
7.加入200-300 ul染色緩沖液,重懸后上機(jī)檢測。
實(shí)驗(yàn)結(jié)果:
數(shù)據(jù)結(jié)果
圈門邏輯:
腫瘤組織中先圈出白細(xì)胞的信號CD45+(圖A),再圈總的CD3+T細(xì)胞(圖B),再分別看CD4(圖C)、CD8(圖D)、NK和NKT(圖E)在淋巴細(xì)胞中的占比,最重要的是看PD-1在淋巴的CD3+T細(xì)胞的雙陽信號(圖F)。腫瘤組織中淋巴細(xì)胞的占比會(huì)下降,特別是發(fā)展到后期,白細(xì)胞整體降低,PD-1在CD3+T中信號明顯。PD-1在CD8+T細(xì)胞中表達(dá)水平較低。
結(jié)果分析總結(jié):
腫瘤組織中,淋巴細(xì)胞亞群傾向百分比降低、分群不明顯,但是此次檢測T細(xì)胞分群基本明顯。
關(guān)于層浪生物
層浪聚焦流式細(xì)胞領(lǐng)域,致力于實(shí)現(xiàn)流式技術(shù)系統(tǒng)化、自動(dòng)化、智能化,在臨床領(lǐng)域推動(dòng)流式技術(shù)的常規(guī)化,在科研領(lǐng)域推進(jìn)國產(chǎn)流式標(biāo)準(zhǔn)化。目前已推出多款流式產(chǎn)品:2激光8色流式細(xì)胞儀于2021年初成功獲得NMPA注冊證;科研型產(chǎn)品3激光14色流式細(xì)胞儀FongCyte™上市一年,儀器性能獲得客戶的高度認(rèn)可;臨床型產(chǎn)品3激光14色流式細(xì)胞儀LongCyte™26種型號均獲CE認(rèn)證。公司核心團(tuán)隊(duì)均在流式技術(shù)領(lǐng)域有10余年經(jīng)驗(yàn),十年如一日專注流式技術(shù)研究,致力于研發(fā)生產(chǎn)穩(wěn)定、可靠、性能優(yōu)異的產(chǎn)品。層浪未來將陸續(xù)推出更多流式產(chǎn)品,為中國的流式技術(shù)發(fā)展盡綿薄之力,做行業(yè)中流式技術(shù)普及者,做客戶信賴的流式伙伴,為中國的臨床和科研事業(yè)助飛。
相關(guān)產(chǎn)品
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