現(xiàn)在,多功能酶標儀基本上是每個生物學實驗室的基礎科研設備。市場上多功能酶標儀品牌主要有Bio-Tek、BMG、MD、PE、Tecan等。每個品牌都有自己的特色和優(yōu)勢產品。而各品牌廠家在對自己產品性能-比如說檢測靈敏度的描述時,除了表征光吸收值的OD值參數(shù)外,像熒光檢測靈敏度、發(fā)光檢測靈敏度等,卻往往沒有一個統(tǒng)一的方式和定義(名稱等)。這對用戶在選購酶標儀時進行儀器間性能的對比會帶來一定的困惑。我們來看看市場上的優(yōu)勢品牌在對熒光檢測靈敏度這一參數(shù)的不同的描述: |
,對于靈敏度的描述,主要有“Sensitivity”和“Detection Limit”兩種說法,我們分別來看它們的定義: |
1.分析方法的檢出限:國際理論與應用化學聯(lián)合會(IUPAC)對檢出限的規(guī)定:對各種光學分析方法,可測量的最小分析信號XL以下式表示:
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2.儀器檢出限:用于評價儀器的檢測能量,即:相對應背景,儀器可靠檢測的最小信號,通常用信噪比S/N來表示,為S/N≥K,根據(jù)置信度概念,K可取2或3,為合理的賦予值。 B: Sensitivity:靈敏度。對于靈敏度概念而言,在IUPAC的定義是:方法的靈敏度m表示被測組分濃度或含量改變一個單位時所引起的分析信號的變化,即m=dX/dc。其中X為分析信號,c為濃度或含量。在分析方法的校正曲線上,一般可以認為靈敏度就是分析校正曲線的斜率。曲線斜率越大,表示靈敏度越高。但在儀器參數(shù)中所說的“Sensitivity”并不是表示這一概念,而是具體指的是“DL(Detection Limit)或LOD(Limit Of Detection)”,比如BMG在Sensitivity的注解中就明確說明指的是“LOD”。如果上述(表中)參數(shù)描述的“Detection Limit”(Tecan/MD/PE)指的是“方法檢出限”且“Sensitivity”(BMG/Bio-Tek/Thermo)指的是“LOD”時,則Sensitivity=LOD=DL=Detection Limit。雖然描述詞不同,但是概念是相同的,其參數(shù)可以直接比較。 |
目前從各廠家公開的資料中,只有BMG明確說明采用國際理論與應用化學聯(lián)合會(IUPAC)的檢測標準去例明參數(shù)。也只有BMG公司在參數(shù)中明確寫明了其Sensitivity的定義,包括定義、詳細的測定條件等。例如在BMG最新推遲的高性能漸變?yōu)V片型光柵多功能酶標儀CLARIOstar的參數(shù)描述中,其FI(熒光)頂讀的靈敏度為FI Filters (top) < 0.4 pM (< 8 amol/well Fluorescein, 384sv, 20 μL),就在參數(shù)后面明確寫明了測試靈敏度時的方法:采用熒光素(Fluorescein)為底物做6點的標準曲線,采用的是384 Small Volume微孔板,20μL的檢測體系。這里要清楚知道,測定參數(shù)時采用的微孔板類型以及檢測體系的體積非常重要。因為不同的條件,其靈敏度計算結果是不一樣的。下面表2為各酶標儀廠家的網站的參數(shù)資料: |
每個廠家都有不同的標準去定出其檢測靈敏度。一般會把所用的檢測濃度和質量寫出來,但也有些廠家或型號只例出濃度單位,例如:Bio-Tek Neo,MD SpectraMax M5/M3等。要全面比較檢測靈敏度,其實要配合濃度、質量和檢測體積幾個要數(shù)作考慮。如果只有濃度(M),那實際檢測的體積是多少?200μl?100μl或是20μl?不同的體積會使實際檢測的質量不同,這可以是十倍或更多的差別。 綜合以上各方面,在對酶標儀的參數(shù)進行對比時,單位的統(tǒng)一非常重要,同時測定參數(shù)時采用的條件同樣重要。對于眾多廠家的儀器,其實很難用一個 一樣的方法去比較,因為不同廠家所用的條件都不一樣。畢竟儀器的性能和表現(xiàn)是要用家使用出來,而不只是靠把參數(shù)寫得漂亮。 |
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