一、凝膠色譜技術是以多孔凝膠為固定相,利用凝膠孔的空間尺寸效應,使不同大小的分子按照由大到小的洗脫順序達到分離的高效液相色譜(HPLC)方法,從而達到凈化的目的。此外,凝膠色譜還有因為惰性微球表面對有機物吸附小所以柱污染小,以及脫鹽等優(yōu)點。
二、在凝膠色譜中,流動相只起溶解樣品的作用,以有機溶劑為流動相的凝膠滲透色譜(GPC)應用較多,而以水為流動相的凝膠過濾色譜(GFC)的應用相對較少,這主要是因為水溶性大分子不僅可以溶于水,通常也能溶于有機溶劑中。四氫呋喃、氯仿、甲苯和二甲基甲酰胺等非極性有機溶劑是常用的流動相。在凝膠色譜中,固定相表面與溶質(zhì)分子間不存在化學相互作用,即固定相是惰性多孔材料。目前凝膠色譜固定相主要使用半硬質(zhì)凝膠(如聚苯乙烯凝膠)和硬質(zhì)凝膠(如多孔硅膠和多孔玻璃珠)。軟質(zhì)凝膠(如葡聚糖)因不耐壓,通常只用于低壓凝膠色譜。
三、主要用于高分子化合物的分子量及其分布的測定、中小分子有機物的分離與定量分析、生物大分子純化(制備凝膠色譜)、凝膠色譜指紋圖譜(如原油及其重質(zhì)組分的評價)和樣品凈化。凝膠滲透色譜(GPC)用于樣品凈化的主要目的是為后續(xù)分析除去干擾物質(zhì)(如大分子基體物質(zhì))或?qū)悠愤M行濃縮。目前,GPC凈化所用凝膠柱尺寸比用于GPC分析的要大。GPC樣品凈化采用的操作方式主要是為了分析生物樣品中的小分子有機物而除去脂肪、蛋白質(zhì)等大分子干擾物質(zhì);有時為了采用液質(zhì)聯(lián)用技術(HPLC-MS)等技術分析生物大分子,也可采用GPC除去樣品中的小分子或脫鹽。
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