成纖維細胞的原代培養(yǎng)可用酶消化法或組織塊法,其中組織塊法又因其操作簡便、條件易于控制而應(yīng)用更為普遍。通常,以酶消化法獲得的成纖維細胞懸液在接種后5~10min即可見細胞以偽足初期附著,與 底物形成一些接觸點;然后細胞逐漸呈放射狀伸展,胞體的中心部分亦隨之變扁平;*快者大約在接種后30min,細胞貼附底物即較為*全,呈現(xiàn)成纖維細胞的形態(tài)。采用組織塊法則大約在接種后2~3天到1周左右,在接種的皮膚組織塊周圍長出細胞。待細胞融合成片,鋪滿培養(yǎng)容器底壁大部分時即可進行傳代。一般都采用 胰蛋白酶(trypsin),將成纖維細胞從底壁消化下來后分瓶作傳代培養(yǎng)。成纖維細胞在體外培養(yǎng)條件下能保持良好的分裂增殖能力。細胞分裂時變?yōu)榍蛐?;分裂后又平鋪在附著物的表面成為有突起的扁平細胞。體外培養(yǎng)的成纖維細胞,其生命期限與物種等因素有關(guān)。
注意事項:
1.收到細胞后,若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染,請立即與我們聯(lián)系。
2.收到細胞先不開瓶蓋,瓶身擦拭酒精后放在培養(yǎng)箱靜置2-4小時(視細胞密度而定)穩(wěn)定細胞狀態(tài)。接著在倒置顯微鏡下觀察細胞生長情況,并對細胞進行不同倍數(shù)拍照(建議收細胞時就整體外觀拍一張照片,觀察培養(yǎng)基的顏色和是否有漏液情況,隨后在顯微鏡下拍下細胞狀態(tài),100*,200*各一張),觀察記錄細胞在運輸過程中是否有污染情況。作為我方進行銷售依據(jù)。
3.由于細胞狀態(tài)受環(huán)境、操作和運輸?shù)榷喾矫嬉蛩赜绊?,故本公司只保證客戶收到細胞后一周內(nèi)的細胞狀態(tài),故客戶需要售后時需出示收到細胞的時間證明及客戶提供收貨時間和發(fā)現(xiàn)問題后客服人員溝通的時間證明,期間間隔時間不能大于7天。
4.所有動物細胞均視為有潛在的生物危害性,必須在二級生物安全臺內(nèi)操作,并請注意防護,所有廢液及接觸過此細胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。
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