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就一個(gè)實(shí)驗(yàn)室而言無(wú)論運(yùn)作的多么好，總會(huì)因?yàn)楦镄录夹g(shù)或拓展方向二影響原來(lái)的流程，從而產(chǎn)生各種各樣的問(wèn)題。有些地方錯(cuò)誤的操作有可能帶來(lái)嚴(yán)重的后果，那么今天主要列舉細(xì)胞生長(zhǎng)緩慢的兩大原因。
01
培養(yǎng)體系出現(xiàn)問(wèn)題
01
檢查你所培養(yǎng)的細(xì)胞是否存在污染。
（1）如果培養(yǎng)細(xì)胞未添加抗生素，細(xì)胞污染則是不可避免的。
① 用肉眼和顯微鏡進(jìn)行檢查。
② 如果細(xì)胞被污染則要棄掉。
（2）由于支原體污染不容易覺(jué)察到，因此必須定期檢測(cè)。
（3）檢測(cè)可能污染的途徑和原因。
02
檢查你用于培養(yǎng)細(xì)胞的培養(yǎng)基和血清（例如：是否批次不同或廠商不同）。如果你常規(guī)使用的是粉劑或10×儲(chǔ)存液，而現(xiàn)在購(gòu)買(mǎi)的培養(yǎng)基更換為1×液體，而隨后證明問(wèn)題就出自于此。
03
如果問(wèn)題與培養(yǎng)基無(wú)關(guān)，那么很可能還是細(xì)胞的問(wèn)題。
（1）復(fù)蘇另一支凍存的細(xì)胞，并且與正在培養(yǎng)的細(xì)胞加以比較。兩種細(xì)胞的培養(yǎng)應(yīng)分開(kāi)，以免在培養(yǎng)之初就產(chǎn)生污染。隨后按（2）～（4）步的方法做排查。
（2）對(duì)傳代培養(yǎng)的細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù)，并繪制生長(zhǎng)曲線，與以前培養(yǎng)該細(xì)胞的資料進(jìn)行比較，檢查是否有下列改變:
① 傳代時(shí)是否接種密度過(guò)低。
② 細(xì)胞傳代是否過(guò)于頻繁。
③ 傳代前細(xì)胞平臺(tái)期是否過(guò)長(zhǎng)。
（3）是否更換了胰蛋白酶或其他分離劑的批號(hào)，檢查批號(hào)和供貨商。
（4）是否細(xì)胞分離過(guò)程中嚴(yán)重?fù)p傷了細(xì)胞，應(yīng)檢測(cè):
① 胰蛋白酶（其他消化試劑）消化時(shí)間是否過(guò)長(zhǎng)。
② 消化液的濃度和活性是否過(guò)高、過(guò)強(qiáng)。
③ 胰蛋白酶消化時(shí)，孵箱溫度是否過(guò)高。
④ 吹打消化細(xì)胞時(shí)是否過(guò)于用力。
⑤ 細(xì)胞是否對(duì) EDTA過(guò)于敏感（如果添加了EDTA）。
⑥ 胰蛋白酶稀釋是否有誤。
⑦ 是否使用了一批劣質(zhì)的胰蛋白酶消化液。
02
檢查共用的設(shè)備和試劑
溫度設(shè)定不準(zhǔn)
01
a 自動(dòng)調(diào)溫器損壞。
b 開(kāi)關(guān)孵箱門(mén)過(guò)于頻繁。
c 孵箱門(mén)未關(guān)緊。
d 風(fēng)扇損壞造成散熱不均。
孵箱濕度不能維持
02
a 水盤(pán)中未加水。
b 孵箱有滲漏。
c 開(kāi)關(guān)孵箱門(mén)過(guò)于頻繁。
d 在Petri培養(yǎng)皿中放置一定量的PBS，每日稱(chēng)重，以檢查蒸發(fā)率。
孵箱的CO2濃度不準(zhǔn)
03
a 開(kāi)關(guān)孵箱門(mén)過(guò)于頻繁。
b CO2控制器出現(xiàn)問(wèn)題。
公 司 簡(jiǎn) 介
武漢尚恩生物技術(shù)有限公司坐落于武漢東湖區(qū)光谷生物城，專(zhuān)注于細(xì)胞及系列產(chǎn)品的研發(fā)、生產(chǎn)和服務(wù)，公司建有標(biāo)準(zhǔn)化GMP實(shí)驗(yàn)室、動(dòng)物房，已整體通過(guò)ISO 9001:2015質(zhì)量管理體系認(rèn)證，獲得企業(yè)、3551人才、瞪羚企業(yè)、科技小巨人等多項(xiàng)榮譽(yù)。
公司主要研發(fā)生產(chǎn)細(xì)胞系、原代細(xì)胞、胎牛血清、基礎(chǔ)培養(yǎng)基、*培養(yǎng)基、輔助試劑等系列產(chǎn)品，提供細(xì)胞及培養(yǎng)配套產(chǎn)品一站式采購(gòu)；細(xì)胞庫(kù)凍存細(xì)胞系500余種，同時(shí)通過(guò)不間斷引種細(xì)胞擴(kuò)大豐富細(xì)胞種類(lèi)；公司還提供人源細(xì)胞系的STR鑒定、大小鼠的種屬鑒定服務(wù)等?！ ?/span>
公司細(xì)胞業(yè)務(wù)覆蓋國(guó)內(nèi)各大高校生物實(shí)驗(yàn)室、生物研究機(jī)構(gòu)及一些生物科研、診斷、制藥公司，不斷為廣大科研工作者提供優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品和服務(wù)！尚恩生物—您專(zhuān)業(yè)的細(xì)胞供應(yīng)商！
END
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