血管異?？赡茉谄つw病中起著至關(guān)重要的作用，如銀屑病、葡萄酒色斑和皮膚癌。為了解這些膚狀況下血管網(wǎng)絡(luò)的情況，來(lái)自美國(guó)和中國(guó)的研究人員Jia Qin等使用基于OCT的UHS-OMAG成像系統(tǒng)，對(duì)銀屑病患者的正常皮膚和病變皮膚進(jìn)行了成像，并定性定量比較了正常與病變皮膚的微循環(huán)差異和結(jié)構(gòu)差異。證明UHS-OMAG可用于皮膚微循環(huán)和量化微血管血管密度的可視化研究。該研究以“In vivo volumetric imaging of microcirculationwithin human skin under psoriatic conditions using optical microangiography”為題發(fā)表于Lasers Surg Med.。

 

研究背景
 

銀屑病是一種慢性炎癥性皮膚病，在西方國(guó)家影響著約2%的人口。有研究發(fā)現(xiàn)損傷皮膚的真皮微血管擴(kuò)張突出，表明銀屑病是血管生成依賴的。Ryan（1969）闡明了銀屑病表皮微循環(huán)從weisuo到肥大的變化，明確描述了銀屑病斑塊中毛細(xì)血管隨時(shí)間的延長(zhǎng)過(guò)程。Creamer（2002）使用光學(xué)顯微鏡證明了淺表乳頭狀真皮中的微血管長(zhǎng)度較短，以及銀屑病病變皮膚中淺表毛細(xì)血管存在擴(kuò)張和伸長(zhǎng)。因此皮膚的微血管系統(tǒng)在臨床診斷和治療中具有重要的參考意義。

 目前對(duì)皮膚內(nèi)脈管系統(tǒng)進(jìn)行體內(nèi)成像的方法也有很多，如毛細(xì)血管鏡和視頻毛細(xì)血管鏡，但成像深度較淺（< 100μm）。激光多普勒灌注成像（LDI）和動(dòng)態(tài)激光散斑成像（LSI）技術(shù)在皮膚病學(xué)中被廣泛用于評(píng)估血管異常，二者都是基于血管中運(yùn)動(dòng)粒子（如紅細(xì)胞）反向散射的光所產(chǎn)生的多普勒效應(yīng)，能夠提供實(shí)時(shí)二維皮膚血流圖。然而上述方法都存在深度不夠的問(wèn)題，無(wú)法用來(lái)準(zhǔn)確評(píng)估病變皮膚微循環(huán)。光聲顯微鏡能夠以高穿透深度（> 1 mm）提取微血管信息?；谘t蛋白在500-600 nm范圍內(nèi)的內(nèi)源性吸收效應(yīng)，該方法可以無(wú)創(chuàng)地提供體積血管信息。但它對(duì)人體皮膚內(nèi)的微循環(huán)成像的空間分辨率較低（> ~50 m），不足以可視化毛細(xì)血管。

 光學(xué)相干斷層掃描（OCT）能夠以高分辨率和高靈敏度對(duì)生物組織進(jìn)行無(wú)創(chuàng)3D成像?；谠摷夹g(shù)開發(fā)出的相位分辨多普勒光學(xué)相干斷層掃描（PRDOCT）能夠獲得功能血管中的血流速度信息。PRDOCT已被用于嚙齒動(dòng)物模型中的腦血流和心臟成像等研究。盡管PRDOCT具有高分辨率和對(duì)血流的高靈敏度，但其成像效果受樣品光學(xué)均勻性和移動(dòng)情況影響較嚴(yán)重。光學(xué)顯微血管造影術(shù)（OMAG）也是基于OCT擴(kuò)展出的成像技術(shù)，利用血管內(nèi)流動(dòng)血細(xì)胞的內(nèi)源性光散射來(lái)產(chǎn)生成像對(duì)比度，能夠?qū)s2 mm深度的微循環(huán)組織內(nèi)動(dòng)態(tài)血液流進(jìn)行無(wú)創(chuàng)3D成像。最新的超高靈敏度OMAG （UHS-OMAG）對(duì)血流的靈敏度可達(dá)4μm/s，已成功地用于對(duì)小鼠大腦皮層和人類皮膚以及人類視網(wǎng)膜內(nèi)的微循環(huán)進(jìn)行成像。

 本文的主要目的是證明UHS-OMAG能夠?qū)φ：筒∽兤つw的皮下血管進(jìn)行活體無(wú)創(chuàng)評(píng)估。選取了一名男性銀屑病患者的一個(gè)銀屑病斑塊（圖1），使用UHS-OMAG系統(tǒng)（圖2）進(jìn)行成像及定量統(tǒng)計(jì)分析。結(jié)果證實(shí)了UHS-OMAG能夠區(qū)分銀屑病病變和正常皮膚中的微血管網(wǎng)，二者的微血管網(wǎng)絡(luò)存在顯著差異。

 

圖1 成像區(qū)域。黃色方框（1）為正常皮膚；紅色方框（2）為銀屑病病變皮膚；

 

圖2 本研究中的UHS-OMAG系統(tǒng)示意圖。SLD為超發(fā)光二極管；PC為偏振控制器；CCD為電荷耦合裝置；

 

結(jié)果與討論
 

01-橫截面圖像和三維體積圖像
 

得到正常和病變部位的截面結(jié)構(gòu)和血管圖像（圖4），其中較明顯的特征是病變皮膚中的乳頭血管（圖4d紅色箭頭）比正常皮膚中的乳頭血管（圖4b黃色箭頭）更豐富且更長(zhǎng)。病變區(qū)域中擴(kuò)張的淺表微血管緊鄰著上覆的無(wú)血管表皮。

 

圖4 正常和病變部位的截面圖像。（a）正常皮膚結(jié)構(gòu)；（b）正常皮膚對(duì)應(yīng)血管；（c）銀屑病病變皮膚；（d）病變皮膚對(duì)應(yīng)血管；其中黃色和紅色箭頭為一些代表性的血管。
 

將橫截面血流圖像與連續(xù)的結(jié)構(gòu)圖像結(jié)合在一起實(shí)現(xiàn)組織形態(tài)和微脈管系統(tǒng)的三維可視化（圖5）。圖5 （a）和（b）分別為正常皮膚和病變皮膚的重疊三維視圖，銀屑病皮膚中的乳頭環(huán)看起來(lái)比較細(xì)長(zhǎng)，而且病變皮膚中的血管比正常皮膚中的血管密集得多。


 

圖5 使用HUS-OMAG獲得的正常皮膚（a）和銀屑病病變皮膚（b）的，融合了微循環(huán)的體積圖像舉例，尺寸2×2×2.2 mm³。

 

02-不同深度的正面微循環(huán)圖像
 

圖6為正常皮膚（上排）和銀屑病病變皮膚（下排）不同深度位置微循環(huán)的正面成像圖，病變皮膚內(nèi)的微循環(huán)與正常皮膚*不同。正常皮膚約210 μm深度處觀察不到明顯的血管網(wǎng)（圖6a），表明該深度層一定屬于表皮層，因?yàn)閺慕馄蕦W(xué)上正常表皮層中沒(méi)有血管。對(duì)應(yīng)同深度病變皮膚，可以看到血管亮點(diǎn)（圖6f），為表皮和真皮之間連接處的乳頭狀環(huán)。這意味著病變皮膚的表皮層比正常皮膚的表皮層薄。
 

圖6b為正常皮膚約340 μm深度的毛細(xì)血管環(huán)，有一些代表性的乳頭狀環(huán)（1標(biāo)記）。這些乳頭環(huán)水平穿過(guò)乳頭層，通過(guò)在乳頭叢中形成毛細(xì)血管環(huán)來(lái)連接真皮小動(dòng)脈和小靜脈。在病變皮膚中，由于血管延長(zhǎng)和微血管新生，乳頭血管亮點(diǎn)（f中2標(biāo)記，g中3標(biāo)記）出現(xiàn)在相對(duì)較深的區(qū)域。在約530 μm深度，由于血管生成，病變皮膚中的血管網(wǎng)絡(luò)（圖6h）比正常皮膚中的血管網(wǎng)絡(luò)（圖6c）更密集。比較更深處的血管網(wǎng)絡(luò)（圖6d和i，e和j），也可以直接觀察到這種血管生成現(xiàn)象。
 

圖6 正常皮膚（上排）和銀屑病病變皮膚（下排）不同深度的正面圖像（x-y平面）。從左到右深度依次為：~210 µm （a和f），~340 µm （b和g），~530 µm （c和h），~720 µm （d和i），~870 µm （e和j）。

 03-量化和統(tǒng)計(jì)分析
 研究人員將血管密度（blood vessel density, BVD）量化，用于比較正常皮膚和病變皮膚內(nèi)血管模式差異。本研究中BVD=血管面積（BVA）/組織斷片總面積（SA），根據(jù)像素?cái)?shù)確定數(shù)值。得到BVD值正態(tài)分布圖（圖7）。
 

圖7 血管密度（BVD）直方圖。藍(lán)色為正常皮膚，紅色為銀屑病病變皮膚。

 為統(tǒng)計(jì)評(píng)估正常皮膚和病變皮膚內(nèi)血管密度的差異，使用了零假設(shè)（H0）和備擇假設(shè)（HA）。H0為銀屑病病變皮膚的BVD平均值與正常皮膚的BVD平均值沒(méi)有區(qū)別。HA為銀屑病病變皮膚的BVD平均值明顯大于正常皮膚的BVD平均值。使用t檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。結(jié)果顯示正常人和銀屑患者皮膚中的血管密度之間差異顯著，P值＜0.001（圖8）。正常皮膚的血管密度（0.3687 ± 0.0422）明顯小于銀屑病皮損的血管密度（0.5286 ± 0.0603）。

 

圖8 正常和銀屑病病變皮膚的BVD誤差柱形圖。（n=50 per group, *P <0.001 at α=0.01）

 

全文小結(jié)
 

本文的成像結(jié)果表明，UHS-OMAG成像系統(tǒng)能夠用于成像正常和銀屑病病變皮膚下的微循環(huán)系統(tǒng)，且銀屑病病變皮膚中的血管密度與正常皮膚中的血管密度相比具有統(tǒng)計(jì)學(xué)上的顯著差異。因此UHS-OMAG成像系統(tǒng)的具有足夠的靈敏度和成像速度來(lái)識(shí)別人體皮膚內(nèi)的微循環(huán)，除銀屑病外，在皮膚癌和葡萄酒色斑等皮膚疾病的診斷和治療評(píng)估中也能夠起到非常大的幫助作用。隨著該技術(shù)的發(fā)展和應(yīng)用，我們可以期望UHS-OMAG在人類皮膚臨床診斷和治療評(píng)估中發(fā)揮出巨大的價(jià)值。 參考文獻(xiàn)：Qin, Jia , et al. "In vivo volumetric imaging of microcirculation within human skin under psoriatic conditions using optical microangiography." Lasers in Surgery & Medicine 43.2(2015):122-129.