生物活性多肽在內(nèi)源性物質(zhì)中占有非常重要的地位,除酶、受體、金屬蛋白等生物大分子外,許多合成或分離的多肽對生理過程或病理過程,對疾病的發(fā)生、發(fā)展或治療過程有重要意義。多肽中的氨基酸殘基彼此以酰胺鍵(也稱肽鍵)相連接。一般來說,含有的氨基酸少于10個的肽段就稱作寡肽,超過的就稱為多肽。多肽與蛋白質(zhì)只有肽鏈長短之別,二者間并沒有嚴(yán)格的區(qū)分。
伴隨著分子生物學(xué)、生物化學(xué)技術(shù)的飛速發(fā)展,多肽研究取得了驚人的的飛躍。人們發(fā)現(xiàn)存在于生物體的多肽有數(shù)萬種,并且發(fā)現(xiàn)所有的細(xì)胞均能合成多肽。同時,幾乎所有的細(xì)胞也都受多肽調(diào)節(jié),它涉及激素、神經(jīng)、細(xì)胞生長與生殖等各個領(lǐng)域。事實(shí)上,肽類藥物開發(fā)與應(yīng)用已走出科學(xué)家們的實(shí)驗(yàn)室,變成了現(xiàn)實(shí),并發(fā)揮著其*的功效。例如,神經(jīng)緊張肽(NT)能降低血壓,對腸和子宮具有收縮作用;促甲狀腺素釋放激素(TRH)是一種能促進(jìn)產(chǎn)婦乳汁分泌的多肽;能治療糖尿病、胃潰瘍、胰腺炎的多肽是一種環(huán)狀的14肽;臨床上常用的催產(chǎn)素是一種多肽;近日來在中國及日本已開始使用的糖肽輔助治療腫瘤,其作用機(jī)理是使淋巴系統(tǒng)活化等等。應(yīng)用多肽技術(shù)開發(fā)的醫(yī)用蛋白質(zhì)芯片(肽芯片)只有指甲蓋大小,放置了與腎炎、胃潰瘍和胃癌等相關(guān)的抗原分子,只要通過芯片閱讀儀便可檢測到有關(guān)疾病的功能狀態(tài)與變異情況。肽芯片的廣泛應(yīng)用,已在醫(yī)學(xué)臨床檢測業(yè)引發(fā)一場技術(shù)革命。
自從1963年Merrifield發(fā)展成功了固相多肽合成(SPPS)方法以來,經(jīng)過不斷的改進(jìn)和完善,到今天這個方法已成為多肽和蛋白質(zhì)合成中的一個常用技術(shù),許多普通的單位都可以通過現(xiàn)成的多肽合成方案進(jìn)行合成。對于新手來說,了解一定的多肽合成的原理,對于認(rèn)識多肽合成的過程,排除合成中碰到的問題都是有好處的。簡單來說,zui基本的程序化的多肽合成工藝無非就是樹脂溶脹、脫保護(hù)、偶聯(lián)、再脫保護(hù)、再偶聯(lián)……其他特殊的合成都是在這個基礎(chǔ)上建立的。對于多肽合成的新手來說,有幾個誤區(qū)需要注意:
多肽合成誤區(qū)一:合成時間越長越好。多肽合成的效率經(jīng)過多年的摸索和優(yōu)化,每一步的合成效率在短時間內(nèi)都能達(dá)到99%以上,過長的反應(yīng)時間對正面的反應(yīng)產(chǎn)率提高非常有限,卻大大增加了副反應(yīng)發(fā)生的機(jī)率,所以過長的反應(yīng)時間并不好。
多肽合成誤區(qū)二:的切肽試劑。大部分的多肽都可以用一套切肽試劑的組合從樹脂上切下來,而對于有特殊側(cè)鏈保護(hù)的氨基酸,往往需要調(diào)整這種組合,而對于沒有側(cè)鏈保護(hù)的多肽序列,是需要加入98%TFA和2%水的溶液就可以完成,要靈活運(yùn)用切肽試劑的組合。
多肽合成誤區(qū)三:氨基酸的側(cè)鏈保護(hù)都一樣。帶有活潑側(cè)鏈的氨基酸在合成中需要保護(hù),根據(jù)側(cè)鏈的不同,保護(hù)基也有不同的選擇。選擇適當(dāng)?shù)谋Wo(hù)基可以有效地減少合成的難度。
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