在實驗室中,用得最多的接種工具是接種環(huán)、接種針。有時滴管、吸管也可作為接種工具進行液體接種。在固體培養(yǎng)基表面要將菌液均勻涂布時,需要用到涂布棒。那么微生物檢驗常見接種方法有哪些呢?
(1)劃線接種法
平板劃線分離法--分區(qū)劃線分離法
?、儆媒臃N環(huán)先將培養(yǎng)物涂布于平板1區(qū)并作數(shù)次劃線,再在2、3……區(qū)依次劃線;
?、诿縿澩暌粋€區(qū)域,轉(zhuǎn)動培養(yǎng)皿約70度角,并將接種環(huán)滅菌一次,待冷后再劃下一區(qū)域;
?、勖恳粎^(qū)域的劃線均接觸上一區(qū)域的接種線1~2次,使接種量逐漸減少,以獲得單個菌落;
?、芷渌僮髋c上述曲線劃線分離法相同。
(2)斜面接種法
主要用于經(jīng)劃線分離培養(yǎng)所獲得的單個菌落的移種,以及觀察細菌的某些培養(yǎng)特征。
以菌種移種為例,其接種方法是:
?、偃∫痪N管和培養(yǎng)基管,置左手食指、中指、無名指間,拇指壓住兩管底部上側(cè)面,使菌種管位于外側(cè),培養(yǎng)基管位于內(nèi)側(cè);
?、谟沂帜粗负褪持阜謩e旋松兩管棉塞。火焰滅菌接種環(huán);
③以右手小指與手掌,小指與無名指分別夾取棉塞(先外管后內(nèi)管),將兩管口迅速通過火焰1~2次;
④將已滅菌的接種環(huán)伸入菌種管中,從斜面上取菌少許,迅速伸入待接種的培養(yǎng)基管中,在斜面底部向上劃一條直線,然后從底部起向上作曲折連續(xù)劃線,直至斜面上方頂端;
⑤取出接種環(huán),火焰滅菌管口,塞上棉塞(先塞內(nèi)管);最后將接種環(huán)經(jīng)火焰滅菌放好;
⑥做好標(biāo)識,置35℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)18~24小時。斜面培養(yǎng)一般形成均勻一致的菌苔。一般可觀察表面、透明度、色澤等特征。
(3)涂布接種法
涂布法接種是一種常用的接種方法,不僅可以用于計算活菌數(shù),還可以利用其在平板表面生長形成菌苔的特點用于檢測化學(xué)因素對微生物的抑殺效應(yīng)。
原理:將一定濃度,一定量的待分離菌液移到已凝固的培養(yǎng)基平板上,再用涂布棒快速地將其均勻涂布,使長出單菌落而達到分離的目的。
(4)液體接種法(肉湯接種)
?、偃缧泵娼臃N法持好菌種管及培養(yǎng)基管;
?、跍缇臃N環(huán),從菌種管取菌,伸入培養(yǎng)基管中,在接近液面的管壁上方輕輕研磨,并沾取少許培養(yǎng)基液體調(diào)和,使細菌混合于培養(yǎng)基的液體中。液體培養(yǎng)基一般以18~24小時培養(yǎng)后觀察生長特征。
肉湯培養(yǎng)可觀察如下幾項:
a.發(fā)育程度:有無生長、微弱、中等、旺盛;
b.混濁度:有無及程度(混、中等、微混、透明)、均勻混濁、有顆粒、絮狀生長;
c.沉淀:有無及量多少、性狀(粉狀、顆粒狀、絮狀、沾性);
d.表面:有無生長、性狀(膜狀、環(huán)狀)、菌膜厚薄及表面特征(光滑、顆粒、皺狀);
e.其他:有無特殊氣味,色素。如果是糖發(fā)酵培養(yǎng)基則主要觀察是否產(chǎn)酸和有無氣體。
(5)穿刺接種法(半固體接種)
多用于保存菌種、觀察動力及厭氧培養(yǎng)等也可以用于觀察細菌的某些生化反應(yīng)。
①如斜面接種法持好菌種管及培養(yǎng)基管;
?、谝詼缇臃N針從菌種管取菌,垂直刺入培養(yǎng)基的中心(半固體或一般瓊脂高層)直達近管底部(但不能*刺到管底),接種針應(yīng)沿原路退出;
③經(jīng)培養(yǎng)后半固體培養(yǎng)基可觀察到:沿穿刺線生長,線外的培養(yǎng)基清亮表示細菌無動力;穿刺線模糊不清,或沿穿刺線向外擴散生長,或整個培養(yǎng)基混濁表示細菌有動力。
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