流式細胞儀是集單克隆抗體、熒光化學(xué)、激光、計算機等高技術(shù)發(fā)展起來的一種先進儀器,已廣泛應(yīng)用于免疫學(xué)、生物化學(xué)、生物學(xué)、腫瘤學(xué)以及血液學(xué)等方面的研究和臨床常規(guī)工作。其中檢測人白細胞表面標(biāo)志可對白血病、淋巴瘤作用迅速正確的診斷,對淋巴細胞群和亞群進行精確分類,還能分離純化某一群或亞群細胞。
活細胞免疫熒光技術(shù)是用于FCM檢測的標(biāo)本準(zhǔn)備,染色后也能在熒光顯微鏡下進行觀察,在某些實驗條件下,活細胞免疫熒光染色后的特異性和敏感性要優(yōu)于滴片固定的常規(guī)間接免疫熒光的結(jié)果。
活細胞免疫熒光技術(shù)是用于FCM檢測的標(biāo)本準(zhǔn)備,染色后也能在熒光顯微鏡下進行觀察,在某些實驗條件下,活細胞免疫熒光染色后的特異性和敏感性要優(yōu)于滴片固定的常規(guī)間接免疫熒光的結(jié)果。
一、流式細胞儀的潛在應(yīng)用,流式細胞術(shù)的潛在應(yīng)用非常多,包括檢測和測量:
1.蛋白質(zhì)表達 - 遍及所有細胞,包括細胞核內(nèi)。
2.蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)譯后修飾 - 包括剪切和磷酸化蛋白質(zhì)。
3.RNA - 包括IncRNA、 miRNA和mRNA轉(zhuǎn)錄物。
4.細胞健康狀態(tài) - 從存活率到晚期凋亡或程序化細胞死亡。
5.細胞周期狀態(tài) - 是評估細胞處于G0/G1期、S期、G2期或多倍體狀態(tài)的強大工具,包括分析細胞凋亡和活化。
6.鑒定和表征異質(zhì)樣本中的不同細胞亞群 - 包括區(qū)分中樞效應(yīng)記憶細胞和耗竭T細胞或調(diào)節(jié)性T細胞。
二、流式細胞儀的三個主要元件是流體學(xué)、光學(xué)和電子學(xué)系統(tǒng):
1.流式細胞儀的流體系統(tǒng)負責(zé)將樣品從樣品管轉(zhuǎn)移到流動池。一旦通過流動池(并通過激光束),樣品將被分選出來(在細胞分選儀中)或移到廢液中。
2.光學(xué)系統(tǒng)的元件包括激發(fā)光源、透鏡和濾光片(用于收集和移動儀器周圍的光)以及用于產(chǎn)生光電流的檢測系統(tǒng)。
3.電子系統(tǒng)是流式細胞儀的大腦。在這里,來自檢測器的光電流經(jīng)過數(shù)字化、處理和保存,以用于后續(xù)分析。
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