一、介紹

制備用于制藥工業(yè)的純對(duì)映體是強(qiáng)制性安全要求的一部分。圓二色譜法是一種測(cè)定對(duì)映體純度的技術(shù)，可直接用于固體樣品。

多年來(lái)，當(dāng)樣品被證明不溶或在更換介質(zhì)時(shí)顯示出結(jié)構(gòu)變化時(shí)，固體樣品的圓二色性測(cè)量一直使用顆粒法進(jìn)行。顆粒的制備并不簡(jiǎn)單，也很耗時(shí)。使用積分球測(cè)量漫反射圓二色附件在MOS-500圓二色光譜儀上幾分鐘即可完成，是顆粒法的替代方案。本申請(qǐng)說(shuō)明說(shuō)明了使用漫反射圓二色附件測(cè)定丙氨酸制劑（L和D形式的粉末混合物）的對(duì)映體純度。

二、漫反射圓二色附件測(cè)試原理

積分球直接安裝在MOS-500圓二色光譜儀光學(xué)臺(tái)的出口處，因此入射光直接照射固體樣品。探測(cè)器安裝在90°的位置，使用擴(kuò)散擋板保護(hù)樣品免受直接反射。積分球的內(nèi)涂層經(jīng)過(guò)精心選擇，以提供從遠(yuǎn)紫外到近紅外區(qū)域的最高反射。探測(cè)器連續(xù)收集漫反射，因此MOS-500圓二色光譜儀可以根據(jù)用戶(hù)要求生成漫反射圓二色譜和漫反射線二色譜。

使用漫反射線性二向色譜作為質(zhì)量測(cè)量，以檢查樣品架和積分球的石英窗是否存在可能扭曲漫反射圓二色譜信號(hào)的偏振效應(yīng)。

三、實(shí)驗(yàn)條件

所有光譜均在200 nm至300 nm范圍內(nèi)記錄，且無(wú)需使用氮?dú)馇逑垂鈱W(xué)元件，因此在該配置中運(yùn)行成本很低。使用0.25 nm的數(shù)據(jù)間隔和4 nm的帶寬測(cè)量光譜。對(duì)每個(gè)粉末樣品進(jìn)行單一光譜分析，以下僅顯示原始數(shù)據(jù)（無(wú)平滑）。

純D-丙氨酸和L-丙氨酸粉末從Sigma Aldrich獲得，用于參考和制備不同的對(duì)映體混合物。

所有粉末均使用研缽和杵研磨，以獲得薄而均勻的粉末。然后將粉末包裝在固體樣品架中。

四、純對(duì)映體的圓二色譜和線二色譜

首先測(cè)量純對(duì)映體的圓二色光譜，以檢查樣品制備的質(zhì)量和測(cè)量的圓二色譜信號(hào)的完整性。L-丙氨酸和D-丙氨酸的光譜如圖2所示。

圖2：L-丙氨酸（藍(lán)線）和D-丙氨酸（紅線）的圓二色光譜

這兩個(gè)光譜是符合理論預(yù)期的鏡像。峰值在214 nm處測(cè)得，mdeg振幅為±31.8。

在樣品不變的情況下，還記錄漫反射線二色光譜，以檢查線性二色性水平，如圖3所示。

圖3：L-丙氨酸（藍(lán)線）和D-丙氨酸（紅線）的漫反射線二色光譜

漫反射線二色的信號(hào)強(qiáng)度中，L-丙氨酸的低于0.0008 △A，D-丙氨酸的低于0.0005 △A，這樣的強(qiáng)度對(duì)CD測(cè)量幾乎沒(méi)有影響。與其他制造商報(bào)告的值相比，我們?cè)O(shè)計(jì)的儀器更好，線二色效應(yīng)對(duì)比其他機(jī)器小4-5倍。

五、已知比例樣品的圓二色譜和線二色譜

用D-丙氨酸和L-丙氨酸的不同混合物制備兩種粉末。樣品A通過(guò)混合50%的L-丙氨酸和50%的D-丙氨酸制備。將75%的L-丙氨酸與25%的D-丙氨酸混合制備樣品B。粉末在研磨前充分混合。

圓二色光譜如圖4所示。樣品A是一種外消旋混合物，不顯示圓二色譜信號(hào)。兩種對(duì)映體以相反的方式作用（圖2所示的鏡像效應(yīng)），對(duì)圓二色光譜的貢獻(xiàn)相等。樣品B顯示了L-丙氨酸的主要貢獻(xiàn)，最大CD信號(hào)為15.9 mdeg。該值與純對(duì)映體振幅測(cè)量得到的理論值*一致。

圖4：純L-丙氨酸（藍(lán)線）和消旋混合物A（紅線）和樣品B（黑線）的圓二色光譜

六、未知樣品

采用相同的方法制備L-丙氨酸和D-丙氨酸成分未知的樣品C。樣品C的圓二色光譜如圖5所示。

圖5：純L-丙氨酸（藍(lán)線）和未知混合物C（紅線）的圓二色光譜

樣品C的最大圓二色光譜信號(hào)為28.1 mdeg。該圓二色光譜對(duì)應(yīng)于94.2%的L-丙氨酸和5.8%的D-丙氨酸的混合物。

七、結(jié)論

MOS-500圓二色光譜儀的漫反射圓二色附件為測(cè)定某些固體樣品的對(duì)映體比例提供了可能性。它顯示了偏振影響可忽略和樣品制備可靠性。本應(yīng)用還顯示了漫反射圓二色附件直至200 nm測(cè)試的性能，無(wú)需用氮?dú)獯祾吖鈱W(xué)元件。