外泌體是包含了復雜RNA和蛋白質的小膜泡，是細胞間信號傳輸?shù)妮d體。多種細胞在正常及病理狀態(tài)下均可分泌外泌體，它們廣泛存在于血液、唾液、尿液、腦脊液和乳汁等體液中，參與細胞間通訊。近年來，外泌體的研究熱度持續(xù)攀升，在2019年國家自然科學基金獲批項目中，外泌體研究相關項目的總數(shù)突破500個，立項的總金額突破2億元。由于外泌體的尺寸很小僅為30~200 nm，目前很少有技術能夠在單個外泌體水平同時提供物理表征和蛋白表型分析。單個外泌體表征分析是將免疫學與光學完·美結合的種新技術。該技術用免疫識別將定的外泌體進行捕獲分離，然后再對目標外泌體的表面標志物及內容物（如攜帶的蛋白質、RNA、DNA及細胞因子）進行定量分析，從而更加全面地反映外泌體的性。

    作為外泌體表征分析的倡·導者，美國NanoView Biosciences于2018年推出了全自動外泌體熒光檢測分析系統(tǒng)ExoView，該系統(tǒng)經推出，便引起了外泌體域科研工作者的廣泛關注，僅兩年在已有100多個實驗室采用該技術，發(fā)表文獻近百篇，刊載在Cell, Cell Biology, Journal of Extracellular Vesicles等期刊?；谥袊饷隗w研究的快速發(fā)展，Quantum Design中國在北京建立了業(yè)的客戶服務中心，正式推出ExoView®外泌體全面表征試劑盒測試服務，只需要少量樣品即可次完成外泌體計數(shù)、粒徑、蛋白表達、蛋白共定位、亞群分布的分析。

    ExoView®外泌體全面表征試劑盒可對細胞培養(yǎng)上清、血漿、血清、尿液、腦脊液、唾液等生物樣本中的外泌體直接進行分析，僅需50 µl稀釋樣本。試劑盒的捕獲抗體為anti-CD81, anti-CD9, anti-CD63, 同型 IgG 對照，也可自定義。此外，試劑盒的熒光抗體分為CD9（Blue）、CD81（Green）、 CD63（Red）。

ExoView®外泌體全面表征試劑盒的勢包括：

• 異性捕獲：芯片上可包被多達6 種捕獲抗體，異性捕獲含定蛋白標記物的外泌體。

• 對陽性外泌體計數(shù)：芯片捕獲外泌體后，可通過單粒子干涉反射成像傳感器（SP-IRIS）技術直接檢測樣品中外泌體的數(shù)量。

• 單個外泌體蛋白共定位分析：檢測每個外泌體的熒光信號并進行統(tǒng)計，可獲得熒光共定位信息，用于分析樣品中不同表型外泌體的比例。

• 無需純化：使用抗體捕獲模式，防止樣品中雜質影響結果，可直接檢測血液、尿液和細胞培養(yǎng)液中的外泌體，未純化樣品的測量結果與純化后基本致。

• 粒徑分辨率高：高精度SP-IRIS技術，可檢測≥50 nm的外泌體，測量結果與電子顯微鏡檢測結果基本致，并統(tǒng)計生成外泌體的粒徑分布結果。

• 可檢測外泌體內容物：試劑盒配套相應的穿膜劑，可穿透外泌體并對外泌體內容物進行染色并檢測，如下圖所示，Non-permeabilized時只能檢測到跨膜蛋白CD9的熒光信號， Permeabilized后即可檢測到外泌體內容物（如PD-L1、P-tau等）的表達。

檢測流程：

試劑盒檢測結果示例：

• 不同外泌體亞群數(shù)量統(tǒng)計

• 外泌體粒徑檢測

• 熒光共定位分析

• 單個外泌體成像圖

部分文獻：

[1]. Characterization of extracellular vesicles and synthetic nanoparticles with four orthogonal single‐particle analysis platforms. Journal of Extracellular Vesicles. 2021

[2]. WJMSC‐derived small extracellular vesicle enhance T cell suppression through PD‐L1. Journal of Extracellular Vesicles. 2021

[3]. Isolation and characterization of extracellular vesicle subpopulations from tissues. Nature protocols. 2021

[4]. Targeting tumor-derived exosomes using a lectin affinity hemofiltration device. Cancer Research. 2021

[5]. Small RNA Sequencing across Diverse Biofluids Identifies Optimal Methods for exRNA Isolation. Cell. 2019

部分應用單位：

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