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高效液相色譜柱的系統(tǒng)由儲液器、泵、進(jìn)樣器、色譜柱、檢測器、記錄儀等幾部分組成。儲液器中的流動相被高壓泵打入系統(tǒng)，樣品溶液經(jīng)進(jìn)樣器進(jìn)入流動相，被流動相載入色譜柱（固定相）內(nèi)，由于樣品溶液中的各組分在兩相中具有不同的分配系數(shù), 在兩相中作相對運(yùn)動時(shí)， 經(jīng)過反復(fù)多次的吸附- 解吸的分配過程，各組分在移動速度上產(chǎn)生較大的差別，被分離成單個組分依次從柱內(nèi)流出， 通過檢測器時(shí)，樣品濃度被轉(zhuǎn)換成電信號傳送到記錄儀，數(shù)據(jù)以圖譜形式打印出來。
高效液相色譜柱怎么裝柱：
1. 色譜柱應(yīng)該是可以直接接在勻漿罐上的，如果不能，則需要一個轉(zhuǎn)換接頭。這個轉(zhuǎn)換接頭的尺寸很重要，既要能防止漏液，又要避免過硬或尺寸不合適而導(dǎo)致色譜柱接口螺紋的損壞；
2. 具體裝柱過程一般來說是①先以合適的勻漿液（多為有機(jī)溶劑，劉國詮老師的《色譜柱技術(shù)》一書中列的比較全，可供參考）將填料充分分散（可以借助攪拌、超聲等方式）；②在填料勻漿的過程中，完成準(zhǔn)備工作，即把色譜柱接在勻漿罐的下端（色譜柱不接勻漿罐的一段要接好篩板和柱頭，確保擰緊但不能擰死以免損壞色譜柱），打開勻漿罐上端和氣泵之間的接頭以便灌入勻漿液；③勻漿液罐好后，接好勻漿罐上端接頭，開始加壓；④選擇合適的壓力，就可以把填料壓實(shí)了；⑤穩(wěn)定在適當(dāng)?shù)膲毫ι蠅阂欢〞r(shí)間后，卸掉壓力，卸下色譜柱，把接勻漿罐這一段的填料抹平，裝上篩板和柱頭即可使用。
3. 裝柱是個困難的過程，需要耐心摸索壓力、勻漿液體積等參數(shù)，才能確保柱床均勻密實(shí)，達(dá)到**柱效和峰形。如果裝的不好，則可能出現(xiàn)柱效不夠，或拖尾等問題。
高效液相色譜柱的選擇：
看你的流動相而定。
正相和反相是根據(jù)固定相和流動相的極性差異定義的。正相是固定相極性大，反相是流動相極性大，而樣品的分離情況與極性直接關(guān)聯(lián)。
像氰基柱和氨基柱，都是正相反相都可以用，主要區(qū)分是根據(jù)你的流動相。如果你的流動相中是水、甲醇、乙腈這些東西，那肯定是反相的。如果是正己烷、乙醇、四氫呋喃這些東西作為流動相，那基本就是正相的。
個人建議，使用反相色譜柱，不要使用正相的流動相。
第一：你色譜柱的填料不同，跑出來的色譜峰可能*不同。檢測方法不可取。
第二：反相色譜柱沖入像是四氫呋喃這類的物質(zhì)，很有可能導(dǎo)致填料坍塌。
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