超微量光度法的應(yīng)用：

定義: 超微量分光光度法是利用物質(zhì)所*的吸收光譜來(lái)鑒別物質(zhì)或測(cè)定其含量的分析檢測(cè)技術(shù)。

特點(diǎn): 靈敏、快速和簡(jiǎn)便，在復(fù)雜組分系統(tǒng)中，不需要分離，即能檢測(cè)出其中所含的極少量物質(zhì)。

應(yīng)用: 生物化學(xué)研究中廣泛使用的方法之一，廣泛用于糖，蛋白質(zhì)，核酸，酶等的快速定量檢測(cè)

超微量分光光度計(jì)的光譜范圍

包括波長(zhǎng)范圍為380~780 nm的可見(jiàn)光區(qū)和波長(zhǎng)范圍為200～380 nm的紫外光區(qū)。不同的光源都有其*的發(fā)射光譜，因此可采用不同的發(fā)光體作為儀器的光源。

   鎢燈的發(fā)射光譜：鎢燈光源所發(fā)出的380～820nm波長(zhǎng)的光譜，光通過(guò)三棱鏡折射后，可得到由紅、橙、黃、綠、藍(lán)、靛、紫組成的連續(xù)色譜；該色譜可作為可見(jiàn)光分光光度計(jì)的光源。

   氘燈的發(fā)射光譜：氘燈能發(fā)出190～400 nm波長(zhǎng)的光譜，可作為紫外光光度計(jì)的光源。  氙氣閃光燈的發(fā)射光譜：氙燈能發(fā)出200～850 nm波長(zhǎng)的光譜，可作為紫外-可見(jiàn)光光度計(jì)的光源。電源體積較小，采用脈沖閃光方式工作，閃光次數(shù)可達(dá)109次，壽命相對(duì)氘燈和鎢燈較長(zhǎng)。

物質(zhì)的吸收光譜

如果在光源和棱鏡之間放上某種物質(zhì)的溶液，此時(shí)在屏上所顯示的光譜已不再是光源的光譜，它出現(xiàn)了幾條暗線，即光源發(fā)射光譜中某些波長(zhǎng)的光因溶液吸收而消失，這種被溶液吸收后的光譜稱為該溶液的吸收光譜。

不同物質(zhì)的吸收光譜是不同的。因此根據(jù)吸收光譜，可以鑒別溶液中所含的物質(zhì)。    

原理

當(dāng)光線通過(guò)某種物質(zhì)的溶液時(shí)，透過(guò)的光的強(qiáng)度減弱。因?yàn)橛幸徊糠止庠谌芤旱谋砻娣瓷浠蚍稚?，一部分光被組成此溶液的物質(zhì)所吸收，只有一部分光可透過(guò)溶液。

入射光 =  反射光 ＋ 分散光 ＋ 吸收光 ＋ 透過(guò)光

        如果我們用蒸餾水(或組成此溶液的溶劑)作為“空白”去校正反射、分散等因素造成的入射光的損失，則：

入射光 = 吸收光 十 透過(guò)光

 分光光度計(jì)進(jìn)行樣品濃度測(cè)定的原理是根據(jù)朗伯-比爾（Lambert-Beer）定律,

A = ε b c

    其中，A ——為物質(zhì)的吸光度；

              ε——為物質(zhì)的吸光系數(shù)；

               b——為光路長(zhǎng)度（光程）；

               c——為物質(zhì)的濃度。