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檢測(cè)器的作用是將色譜柱流出物中樣品組成和含量的變化轉(zhuǎn)化為可供檢測(cè)的信號(hào)，從而定性定量分析待測(cè)組分。對(duì)于大部分液相色譜操作人員來(lái)說(shuō)，基本都掌握了儀器分析原理和操作方法，但對(duì)于儀器內(nèi)部各部件的類型和適用條件不是非常熟悉，往往是有什么用什么，一概而定，尤其是檢測(cè)器，不同的檢測(cè)器其使用范圍有所不同，如果不熟悉檢測(cè)器而一味按照既定的實(shí)驗(yàn)方法，可能會(huì)引起不必要的誤差甚至是實(shí)驗(yàn)失敗。因此需要掌握不同檢測(cè)器的原理。液相色譜常用的檢測(cè)器包括紫外檢測(cè)器、熒光檢測(cè)器、示差折光檢測(cè)器、蒸發(fā)光散射檢測(cè)器、化學(xué)發(fā)光檢測(cè)器、質(zhì)譜檢測(cè)器等。
紫外檢測(cè)器(UVD)
是目前液相色譜中應(yīng)用*泛的檢測(cè)器。自然界中大部分有機(jī)物和部分無(wú)機(jī)物都具有紫外吸收能力，UV檢測(cè)器根據(jù)化合物對(duì)紫外光的吸收能力，通過(guò)二極管將光信號(hào)轉(zhuǎn)變?yōu)殡娦盘?hào)，從而進(jìn)行分析。它有兩個(gè)流通池，一個(gè)作參比，一個(gè)作測(cè)量用，光源發(fā)出的紫外光照射到流通池上，若兩流通池都通過(guò)純的均勻溶劑，則它們?cè)谧贤獠ㄩL(zhǎng)下幾乎無(wú)吸收，光電管上接受到的輻射強(qiáng)度相等，無(wú)信號(hào)輸出。當(dāng)組分進(jìn)入測(cè)量池時(shí)，吸收一定的紫外光，使兩光電管接受到的輻射強(qiáng)度不等，這時(shí)有信號(hào)輸出，輸出信號(hào)大小與組分濃度有關(guān)。
使用過(guò)紫外檢測(cè)器的人應(yīng)該都會(huì)發(fā)現(xiàn)，很多標(biāo)準(zhǔn)方法中都是以254nm作為檢測(cè)波長(zhǎng)的，那為什么是這個(gè)波長(zhǎng)呢？因?yàn)樵谝合嗌V檢測(cè)器的發(fā)展過(guò)程中使用最久的是低壓汞燈，而汞的最大發(fā)射波長(zhǎng)是253.7nm，也就是說(shuō)在254nm波長(zhǎng)下，燈能量最高，檢測(cè)靈敏度最好。但現(xiàn)階段，很多紫外檢測(cè)器采用的是氘燈，這時(shí)候254nm的檢測(cè)波長(zhǎng)其實(shí)意義不大，氘燈的使用范圍一般是190-800nm，需要考慮化合物的最大吸收波長(zhǎng)并且避開流動(dòng)相的吸收干擾來(lái)選擇合適的檢測(cè)波長(zhǎng)。這就限制了其流動(dòng)相的選擇范圍，一般檢測(cè)波長(zhǎng)要避開溶劑截止波長(zhǎng)20nm以上。
熒光檢測(cè)器(FLD)
是目前液相色譜靈敏度最高的檢測(cè)器，應(yīng)用廣泛，選擇性強(qiáng)。適用于能激發(fā)熒光的化合物。很多與生命科學(xué)有關(guān)的物質(zhì)，如氨基酸、胺類、維生素、甾族化合物及某些代謝藥物都可以用熒光法檢測(cè)。熒光檢測(cè)器在生物樣品痕量分析中具有重要作用，尤其在用熒光衍生后，可以檢測(cè)很微量的氨基酸和肽。在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中需要嚴(yán)格脫氣，因?yàn)橄到y(tǒng)中殘留的氧氣會(huì)引發(fā)熒光淬滅反應(yīng)，造成峰面積大幅下降甚至不出峰。
示差折光檢測(cè)器(RID)
是一種通用型檢測(cè)器，利用物質(zhì)的折光效應(yīng)，對(duì)所有物質(zhì)均有響應(yīng)，只要被測(cè)組分與洗脫液的折光指數(shù)有差別就可使用。生命科學(xué)中常遇到各類糖類化合物、脂肪烷烴等，沒(méi)有紫外吸收，一般常用示差折光檢測(cè)器。它的通用性比UVD廣，但靈敏度要低，對(duì)溫度變化敏感，是所有檢測(cè)器中對(duì)溫度要求最高的。另外，不同的流動(dòng)相比例，其密度或者折光系數(shù)不同，如果流動(dòng)相比例發(fā)生改變，則會(huì)引起基線的持續(xù)變化，因此示差折光檢測(cè)器只能采用等度洗脫，不能采用梯度洗脫，這也限制了它的使用。
蒸發(fā)光散射檢測(cè)器(ELSD)
也是一種通用型的檢測(cè)器，原理是利用光散射效應(yīng)，可檢測(cè)揮發(fā)性低于流動(dòng)相的任何樣品，通過(guò)霧化器去除溶劑，讓化合物形成懸浮顆粒，從而形成散射效應(yīng)。ELSD靈敏度比RID高，對(duì)溫度變化不敏感，基線穩(wěn)定，可用于梯度洗脫，并且可在沒(méi)有標(biāo)準(zhǔn)品和化合物結(jié)構(gòu)參數(shù)未知的情況下檢測(cè)未知化合物，但不能使用不揮發(fā)的鹽類溶劑，而要用醋酸銨之類的揮發(fā)性緩沖鹽來(lái)代替?，F(xiàn)在ELSD已被廣泛應(yīng)用于碳水化合物、類脂、脂肪酸和氨基酸、藥物以及聚合物等的檢測(cè)。
化學(xué)發(fā)光檢測(cè)器(CD)
化學(xué)發(fā)光檢測(cè)器是近年來(lái)發(fā)展起來(lái)的一種快速、靈敏的新型檢測(cè)器，因其設(shè)備簡(jiǎn)單、價(jià)廉、線性范圍寬等優(yōu)點(diǎn)。其原理是基于某些物質(zhì)在常溫下進(jìn)行化學(xué)反應(yīng)，生成處于激發(fā)態(tài)勢(shì)反應(yīng)中間體或反應(yīng)產(chǎn)物，當(dāng)它們從激發(fā)態(tài)返回基態(tài)時(shí)，就發(fā)射出光子。由于物質(zhì)激發(fā)態(tài)的能量是來(lái)自化學(xué)反應(yīng)，故叫作化學(xué)發(fā)光。當(dāng)分離組分從色譜柱中洗脫出來(lái)后，立即與適當(dāng)?shù)幕瘜W(xué)發(fā)光試劑混合，引起化學(xué)反應(yīng)，導(dǎo)致發(fā)光物質(zhì)產(chǎn)生輻射，其光強(qiáng)度與該物質(zhì)的濃度成正比。該檢測(cè)器不需要光源，也不需要復(fù)雜的光學(xué)系統(tǒng)，只要有恒流泵，將化學(xué)發(fā)光試劑以一定的流速泵入混合器中，使之與柱流出物迅速而又均勻地混合產(chǎn)生化學(xué)發(fā)光，通過(guò)光電倍增管將光信號(hào)變成電信號(hào)，就可進(jìn)行檢測(cè)。這種檢測(cè)器的最小檢出量可10-12g。
質(zhì)譜檢測(cè)器(MSD)
也是一種通用型檢測(cè)器，在靈敏度、選擇性、通用性及化合物的分子量和結(jié)構(gòu)信息的提供等方面都有突出的優(yōu)點(diǎn)。但它的昂貴操作費(fèi)用和復(fù)雜性在一定程度上限制了它的推廣應(yīng)用。理解了這些檢測(cè)器的原理可以幫助我們?cè)趯?shí)驗(yàn)中更好地選擇和使用檢測(cè)器，更高效率地完成檢測(cè)任務(wù)。
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