關(guān)于進(jìn)口化妝品洋蔥伯克霍爾德菌的檢驗(yàn)方法!
關(guān)于進(jìn)口化妝品洋蔥伯克霍爾德菌的檢驗(yàn)方法!
洋蔥伯克霍爾德菌(Burkholderia cepacia,BC)曾名為洋蔥假單胞菌(Pseudomonas cepacia),因引起洋蔥球莖腐爛而得名,1993年改為現(xiàn)名。
一、生物學(xué)特性:
洋蔥伯克霍爾德菌為革蘭陰性桿菌,對營養(yǎng)要求不高,一般在普通培養(yǎng)基生長良好,zshihe生長溫度為30℃,在4℃不生長,42℃生長不定。
二、分布范圍:
洋蔥伯克霍爾德菌存在于土及水中,在醫(yī)院環(huán)境中常污染自來水體溫計(jì)噴霧器、血管導(dǎo)管、導(dǎo)尿管、靜脈輸液器等,因而可多種醫(yī)院內(nèi)感染,包括敗血癥、心內(nèi)膜炎、肺炎、傷口感染、膿腫、眼結(jié)膜炎等,是條件致病菌。其細(xì)胞膜的不通透性使其對大多數(shù)抗生素產(chǎn)生耐藥,在醫(yī)院易引起暴發(fā)流行,是醫(yī)院感染的重要病原菌之一。
三、檢驗(yàn)流程:
根據(jù)SN/T4684-2016進(jìn)出口化妝品洋蔥伯克霍爾德菌檢驗(yàn)方法規(guī)定,檢驗(yàn)流程如下:
四、典型菌落特征:
含多粘菌素B、慶大霉素的BCSA瓊脂:紅色圓形菌落,表面光滑,周圍培養(yǎng)基變紅
含多粘菌素B、慶大霉素的麥康凱瓊脂:淺黃褐色圓形菌落,表面光滑,周圍培養(yǎng)基不變色
五、生化鑒定:
1、葡萄糖氧化實(shí)驗(yàn):
挑取可疑菌落,接種于2 支葡萄糖發(fā)酵管,其中一支加滅菌液體石蠟封口,另一支不封口,36℃土1℃,24h。二者均變黃為葡萄糖發(fā)酵型,未加石蠟管變黃而加石蠟管不變色為葡萄糖氧化型。
選擇葡萄糖氧化型,在營養(yǎng)瓊脂平板上劃線純化培養(yǎng),36℃士1℃,24 h。純培養(yǎng)養(yǎng)物繼續(xù)進(jìn)行鑒定。
2、革蘭氏染色:
挑取可疑菌落涂片,進(jìn)行革蘭氏染色。顯微鏡鏡下觀察,洋蔥伯克霍爾德菌為革蘭氏陰性無芽孢桿菌。
3、氧化酶試驗(yàn):
用玻璃棒或一次性接種針挑取單個(gè)特征性菌落,涂布在氧化酶試劑濕潤的濾紙平板上。洋蔥伯克霍爾德菌為遲緩型氧化酶陽性(紫紅色、紫色、或深藍(lán)色),反應(yīng)時(shí)間約為2min - 10min。
注:實(shí)驗(yàn)中切勿使用鎳/鉻材料
4、過氧化氫酶實(shí)驗(yàn):
用玻璃棒或一次性接種針挑取單個(gè)特征性菌落,置于潔凈室管內(nèi),滴加3%過氧化氫溶液(臨用時(shí)配置)2ml,觀察氣泡產(chǎn)生情況。洋蔥伯克霍爾德菌為遲緩產(chǎn)氣,1s后出現(xiàn)氣泡。
5、蔗糖氧化實(shí)驗(yàn):
挑取可疑菌落接種于蔗糖氧化培養(yǎng)基上,36℃±1℃,24h。培養(yǎng)基變黃色為陽性,藍(lán)色為陰性。洋蔥伯克霍爾德菌為陽性反應(yīng)。
6、枸櫞酸鹽利用:
挑取可疑菌落接種于西蒙氏枸櫞酸鹽培養(yǎng)基,36℃±1℃培養(yǎng)24h,培養(yǎng)基變藍(lán)色為陽性,淺綠色為陰性。洋蔥伯克霍爾德菌為陽性反應(yīng)。
7、七葉苷利用:
挑取可疑菌落接種于七葉苷培養(yǎng)基,30℃士1℃培養(yǎng) 24 h ,培養(yǎng)基變黑色為陽性,不變色為陰性。洋蔥伯克霍爾德菌為陽性反應(yīng)。
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