大鼠前降鈣素試劑盒

我司大鼠前降鈣素試劑盒細(xì)胞近3000種，來源于美國ATCC,細(xì)胞都是經(jīng)過嚴(yán)格質(zhì)量控制，在中國大陸努力搭建正牌細(xì)胞與國內(nèi)廣大科研人員之間的溝通橋梁，還有更多相關(guān)實(shí)驗(yàn)產(chǎn)品，標(biāo)準(zhǔn)品，細(xì)胞株和實(shí)驗(yàn)技術(shù)服務(wù)等等前期后續(xù)服務(wù)。 

細(xì)胞株

　　Q1. 液體培養(yǎng)基的保存是冷藏好？還是冷凍好？

　　要冷藏！！因?yàn)橐后w培養(yǎng)基經(jīng)冷凍后再經(jīng)溶化時(shí)，其溶液的pH值會發(fā)生改變，溶液往往變堿，某些成分溶解也會受到影響對細(xì)胞生長不利。故液體培養(yǎng)基一定要存放在冷藏箱中，通常液體培養(yǎng)基在冷藏條件下可存放6個(gè)月 ~ 一年。

　　Q2. 液體培養(yǎng)基中谷氨酰胺的作用，及使用方法。

　　幾乎所有的細(xì)胞對谷氨酰胺有較高的要求，細(xì)胞需要谷氨酰胺合成蛋白質(zhì)，在缺少谷氨酰胺時(shí)，細(xì)胞生長不良而死亡。所以，各種培養(yǎng)液中都含有較大量的谷氨酰胺。谷氨酰胺在溶液中很不穩(wěn)定，應(yīng)置-20 ?C冰凍保存，用前加入培養(yǎng)基中。加有谷氨酰胺的液體培養(yǎng)基4 ?C 冰箱儲存兩周以上時(shí)，應(yīng)重新加入原來量的谷氨酰胺?；A(chǔ)醫(yī)學(xué)細(xì)胞中心在其服務(wù)項(xiàng)目中配制分裝了高濃度（100倍）的谷氨酰胺溶液（1ml/支）。每支1ml的谷氨酰胺加到99ml*培養(yǎng)基中，其終濃度為2mM/ml培養(yǎng)基。包裝為粉紅色，-24?C保存。

1、原理：
(1)計(jì)算細(xì)胞數(shù)目可用血球計(jì)數(shù)盤或是Coultercounter粒子計(jì)數(shù)器自動計(jì)數(shù)。
(2)血球計(jì)數(shù)盤一般有二個(gè)chambers，每個(gè)chamber中細(xì)刻9個(gè)1mm2大正方形，其中4個(gè)角落之正方形再細(xì)刻16個(gè)小格，深度均為0.1mm。當(dāng)chamber上方蓋上蓋玻片后，每個(gè)大正方形之體積為1mm2×0.1mm=1.0x10-4ml。使用時(shí)，計(jì)數(shù)每個(gè)大正方形內(nèi)之細(xì)胞數(shù)目，乘以稀釋倍數(shù)，再乘以104，即為每ml中之細(xì)胞數(shù)目。
(3)存活測試之步驟為dyeexclusion，利用染料會滲入死細(xì)胞中而呈色，而活細(xì)胞因細(xì)胞膜完整，染料無法滲入而不會呈色。一般使用藍(lán)色之trypan blue染料，如果細(xì)胞不易吸收trypan blue，則用紅色之Erythrosin bluish。計(jì)算細(xì)胞活率：活細(xì)胞數(shù)/(活細(xì)胞數(shù)+死細(xì)胞數(shù))×100%。計(jì)數(shù)應(yīng)在臺盼蘭染色后數(shù)分鐘內(nèi)完成，隨時(shí)間延長，部分活細(xì)胞也開始攝取染料;因?yàn)榕_盼蘭對蛋白質(zhì)有很強(qiáng)的親和力，用不含血清的稀釋液，可以使染色計(jì)數(shù)更為準(zhǔn)確。

　　Q4.細(xì)胞特性
在細(xì)胞培養(yǎng)之前，我們要了解一下你所要養(yǎng)細(xì)胞的基本特性，這點(diǎn)可以從細(xì)胞的產(chǎn)品說明書或者從ATCC細(xì)胞庫查詢。除此之外我們還要知道每管細(xì)胞的數(shù)量，建議分裂或傳代的比例，和已知細(xì)胞的傳代代次等信息。

　　Q5.準(zhǔn)備培養(yǎng)基
復(fù)蘇細(xì)胞時(shí)需要準(zhǔn)備合適的培養(yǎng)基，血清和細(xì)胞生長所需的添加劑。大部分培養(yǎng)細(xì)胞所用的培養(yǎng)體系，可以在訂購細(xì)胞系時(shí)獲得。
雖然大多數(shù)細(xì)胞系可以在不止一種培養(yǎng)基中生長，但是當(dāng)培養(yǎng)基改變時(shí)，細(xì)胞的性質(zhì)也會變化。因此，使用細(xì)胞庫推薦的培養(yǎng)基來培養(yǎng)細(xì)胞會獲得的效果。

　　Q6.開啟凍存管
1.準(zhǔn)備一個(gè)培養(yǎng)瓶，加入適宜細(xì)胞培養(yǎng)的培養(yǎng)基，液體體積按照說明書的推薦配置，并平衡培養(yǎng)基的溫度和pH（CO2）?！?br />2.在37℃水浴中或細(xì)胞的正常生長溫度下將凍存管輕輕搖動。解凍要快，約2分鐘或直到冰晶融化即可。
3.從水浴中取出凍存管并用浸泡或噴灑70%乙醇的方式來消毒。進(jìn)一步的操作均需在無菌操作臺中嚴(yán)格無菌條件下進(jìn)行。
4.擰開凍存管的管帽并將內(nèi)容物轉(zhuǎn)移到一個(gè)含有9 ml推薦培養(yǎng)基的無菌離心管中。通過溫和離心（125×g 10 min）除去冷凍保護(hù)劑（DMSO）。棄去上清，并用1或2 ml*培養(yǎng)基重懸細(xì)胞。將這些細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到含有*培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中并輕輕搖動以*混勻。
5.培養(yǎng)24小時(shí)后檢查細(xì)胞狀態(tài)并在需要時(shí)進(jìn)行傳代。

　　Q7. 培養(yǎng)用液pH對細(xì)胞生長的影響

　　由于，大多數(shù)細(xì)胞適宜pH為7.2~7.4，偏離此范圍對細(xì)胞將產(chǎn)生有害的影響。各種細(xì)胞對pH的要求也不*相同，原代培養(yǎng)細(xì)胞一般對pH變動耐受差，無限細(xì)胞系耐受力強(qiáng)。但總體來說，細(xì)胞耐酸性比耐堿性強(qiáng)一些，偏酸環(huán)境中更利于細(xì)胞生長。因此，我們在配制培養(yǎng)用液時(shí)，可把液體的pH稍微調(diào)得偏酸一些。液體在經(jīng)過0.10um或0.22um濾膜過濾時(shí)，溶液的pH還會向上浮動0.2左右。