項(xiàng)目背景
作為農(nóng)業(yè)大國(guó)，我國(guó)對(duì)農(nóng)藥的使用歷史悠久、種類繁多。然而農(nóng)藥的使用給農(nóng)業(yè)帶來(lái)產(chǎn)量保證的同時(shí)，也由于把控不嚴(yán)，很容易產(chǎn)生濫用情況。污染環(huán)境是其一，更深層次的是容易使人誤食農(nóng)藥殘留超標(biāo)的農(nóng)產(chǎn)品，輕則對(duì)人身健康造成危害，重則危及生命。
常見(jiàn)的農(nóng)藥主要包括有機(jī)磷類、擬------除----蟲------菊-----酯-----類、氨基甲酸酯類、除草劑及其它水溶性農(nóng)藥。大量研究表明，農(nóng)藥暴露與某些慢性疾病的發(fā)生率升高之間存在著聯(lián)系，包括癌癥、帕金森病、阿爾茨海默病、多發(fā)性硬化癥、糖尿病、心血管疾病、慢性腎臟病及不育癥等。此外，由于意外、自----殺或故意犯-----罪而導(dǎo)致的急性農(nóng)藥中毒案例也時(shí)見(jiàn)報(bào)道。
由于毒物分析所面對(duì)的測(cè)定對(duì)象多為未知物，并且含量較低，同時(shí)檢測(cè)樣品多為血液、尿液、組織及嘔吐物等復(fù)雜樣品，因此研究和尋找適合多種化合物同時(shí)分析，具有一定通用性的快速分析篩選方法就成為急救醫(yī)學(xué)的重要研究?jī)?nèi)容之一。
隨著質(zhì)譜技術(shù)的發(fā)展，色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)（LC-MS/MS）由于具有靈敏度高、檢測(cè)范圍廣的特點(diǎn)，已成為較為成熟且被廣泛運(yùn)用。
故根據(jù)臨床市場(chǎng)檢測(cè)需求，基于液質(zhì)平臺(tái)開(kāi)發(fā)針對(duì)血液中常見(jiàn)數(shù)十種農(nóng)藥精準(zhǔn)篩查的方法， 一方面可做到對(duì)農(nóng)藥中毒的定性診斷：對(duì)于一些患者診斷不明確，需要與中毒鑒別診斷時(shí)，可以第一時(shí)間實(shí)現(xiàn)農(nóng)藥中毒的定性診斷，為臨床醫(yī)生早期采取積極治療提供了客觀依據(jù)；
另一方面可做到對(duì)于農(nóng)藥中毒的定量檢測(cè)：對(duì)于診斷明確的中毒患者，體內(nèi)毒物的定量檢測(cè)，不僅可以評(píng)估患者的預(yù)后，還可以指導(dǎo)制定最佳的毒物清除方案，如指導(dǎo)血液凈化清除相關(guān)毒物，既能防止對(duì)患者的過(guò)度醫(yī)療，浪費(fèi)患者的物力財(cái)力、又能避免治療不足，增加患者的死亡風(fēng)險(xiǎn)。
臨床報(bào)道案例
患者信息：2019 年 9 月，甘肅省某男子在家中用餐后中毒死亡，經(jīng)調(diào)查其妻子在該名男子所喝菜湯中加入了農(nóng)藥，農(nóng)藥來(lái)自于一標(biāo)有 “氯氰菊酯"字樣的塑料瓶，瓶?jī)?nèi)農(nóng)藥已被倒光。送檢檢材包括塑料瓶的甲醇提取液約 5 mL，死者血液樣品約 3 mL。
臨床檢測(cè)：取 10 μL 塑料瓶提取液用甲醇逐級(jí)稀釋 1 000 倍進(jìn)行分析，檢出高濃度的敵----敵----畏、毒死蜱和氯氰菊酯。
結(jié)果：取死者血液樣品 200 μL 按照本研究所建立的方法進(jìn)行分析，檢出敵-------敵-------畏 189. 04 ng /mL，tＲ = 4. 93 min，定量離子對(duì) 220. 9 /109. 0( m/z) ; 毒死蜱 171. 32 ng /mL，tＲ =11. 79 min，定量離子對(duì) 349. 9 /197. 9( m/z) ; 氯氰菊酯 106. 50 ng /mL，tＲ =12. 73 min，定量離子對(duì) 433. 1 /191. 0( m/z) ，其色譜圖見(jiàn)下圖。
三種農(nóng)藥的色譜圖
結(jié)論：實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明該LC-MS/MS方法可應(yīng)用于實(shí)際案例的檢測(cè)，為法醫(yī)毒理學(xué)生物基質(zhì)中多農(nóng)藥的檢驗(yàn)鑒定提供了高效可靠的途徑。
項(xiàng)目?jī)?nèi)容
本研究結(jié)合實(shí)際中毒案例，選取了常見(jiàn)的數(shù)十種農(nóng)藥( 詳見(jiàn)第三部分藥物種類) 。結(jié)合高效液相色譜 -串聯(lián)質(zhì)譜(LC-MS /MS) 技術(shù)進(jìn)行分析研究，通過(guò)優(yōu)化前處理和分析條件，建立了同時(shí)測(cè)定血液中農(nóng)藥的方法。該方法簡(jiǎn)單高效，實(shí)現(xiàn)了一針進(jìn)樣同時(shí)對(duì)數(shù)十種農(nóng)藥進(jìn)行分析的目的，對(duì)臨床和法醫(yī)毒物檢驗(yàn)工作具有重要意義。
儀器設(shè)備
型號(hào)：PreMed 5200 （浙械注淮20222220115）
標(biāo)準(zhǔn)品、試劑
數(shù)十種農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)品（20mg/L）、甲醇、甲酸銨、甲酸為色譜級(jí)，檸檬酸鈉、檸檬酸氫二鈉、氯化鈉、乙酸鈉、無(wú)水硫酸鎂為分析純，乙腈為色譜純。
質(zhì)譜條件
監(jiān)測(cè)模式為多反應(yīng)監(jiān)測(cè)(MRM)，部分化合物監(jiān)測(cè)離子對(duì)、碰撞電壓(CE)等參數(shù)見(jiàn)下表。
樣品前處理
詳見(jiàn)杭州譜聚醫(yī)療的毒物篩選檢測(cè)試劑說(shuō)明書。
結(jié)果
典型圖譜。數(shù)十種農(nóng)藥的MRM疊加色譜圖如下圖所示：
重復(fù)性。經(jīng)過(guò)驗(yàn)證，測(cè)得農(nóng)藥及其代謝物的峰面積重復(fù)性RSD均小于10%，滿足方法學(xué)驗(yàn)證要求。
結(jié)論
本項(xiàng)目建立了液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜同時(shí)測(cè)定血液中數(shù)十種農(nóng)藥的方法。該方法簡(jiǎn)便快速、靈敏度高、穩(wěn)定性好，滿足了實(shí)際工作中一針進(jìn)樣同時(shí)對(duì)數(shù)十種農(nóng)藥進(jìn)行定性定量分析的需求，為臨床多農(nóng)藥的檢驗(yàn)鑒定提供了高效可靠的途徑。
藥物種類
解決方案
檢測(cè)方法：液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法（LC-MS/MS）。
專業(yè)高效的檢測(cè)流程：血樣采集——>高通量的樣本前處理方案——>上機(jī)檢測(cè)——>自動(dòng)審核數(shù)據(jù)及生成報(bào)告。
儀器：超高效液相色譜儀（具體配有二元超高壓輸液泵、超高壓自動(dòng)進(jìn)樣器、柱溫箱）、PreMed 5200 液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜系統(tǒng)。
質(zhì)譜條件：使用APCI源，監(jiān)測(cè)模式為多反應(yīng)監(jiān)測(cè)(MRM)。為提高檢測(cè)靈敏度，可根據(jù)保留時(shí)間分段監(jiān)測(cè)各化合物。
關(guān)于譜聚
聚光科技生命科學(xué)板塊旗下譜聚醫(yī)療是一家醫(yī)療臨床質(zhì)譜產(chǎn)品服務(wù)平臺(tái)，聚焦于質(zhì)譜硬件及配套個(gè)性化定制、臨床醫(yī)學(xué)樣本檢測(cè)體外診斷試劑盒產(chǎn)品及應(yīng)用技術(shù)、臨床科研合作等領(lǐng)域，將竭誠(chéng)為客戶提供集成化、自動(dòng)化、標(biāo)準(zhǔn)化和流程化的臨床質(zhì)譜解決方案，使客戶享受一站式的定制化服務(wù)。并致力于提供普惠大眾的臨床質(zhì)譜技術(shù)，推動(dòng)中國(guó)臨床質(zhì)譜深入發(fā)展和突破卡脖子關(guān)鍵難題。
參考文獻(xiàn)：杜秋瑤，張?jiān)品?，王繼芬，超高效液相色譜 -串聯(lián)質(zhì)譜法同時(shí)測(cè)定血液中 115 種農(nóng)藥[J] 2020,39(4) : 485 ～ 491.
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