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技術(shù)文章
多肽知識
點擊次數(shù)：1173 發(fā)布時間：2008-1-17
多肽知識 |
| ◎ 多肽的保存 多肽在-20℃很穩(wěn)定，特別是冷凍干燥并保存在干燥器中，在將它們暴露于空氣之前， 冷凍干燥多肽可以放于室溫。這將是濕度影響減少，當無法冷凍干燥時，的方法是以小的工作樣量存放。 對于含Cys, Met orTrP的多肽，脫氧緩沖劑對其溶解*，因為這種多肽可易空氣氧化， 在封瓶前，慢慢流過多肽的氮氣或氬氣也會降低氧化作用。含Gln或Asn的多肽也容易降解，所有這些肽與不含這些有問題解苷的那些肽相比，生命期有限。 ◎ 多肽的溶解性 大多數(shù)肽的溶劑是超純抽氣水。稀乙酸或氨水分別對于堿性或酸性多肽的溶解很重要。這些方法不溶的多肽， 需要DMF、脲、guanidiniam chloride或acetonitnle來溶解，這些溶劑可能某些實驗有副作用。所以我們建議設(shè)計多肽時要加注意?！ 埢鵄la, Cys , Ile, Leu, Met, Phe和Val將全增加多肽的溶解難度。 您需要特殊的多肽或任何技術(shù)幫助，請隨時與我們。 我們包你*滿意，對于我們不能適當合成的順序，我們不收費。 ◎ 多肽的保存和操作 包裝 1mg或更少的多肽按凈重包裝，聲明的小瓶重不含相關(guān)抗離子和水。 例如，氨基酸分析決定的肽含量是80%， 在1mg樣品中，那么瓶中毛重是1.25mg?！ 〈罅康亩嚯囊悦厮?。標出的重量含相關(guān)抗離子和水， 例如，25mg樣品中肽百分比為90%，那么，實際肽量為25mg×90%=22.5mg 不要把肽含量和純度搞混了。肽的純度可能是100%， 而肽含量相關(guān)帶電基團（如Arg, Lys ）的抗離子量和肽親水性決定。這是合成肽的本身特性。 ◎ 凍干肽的保存 所有產(chǎn)品應(yīng)存于冰箱， 為-20℃。多數(shù)肽以此方法可以存放幾年不變。 ◎ 肽溶液的保存 溶液肽遠比凍干形式不穩(wěn)定，溶液應(yīng)為中性pH(pH5-7), -20℃保存的，為避免樣品的反復(fù)凍融， 分成小樣存放。一份樣品融凍后未用完， 應(yīng)扔掉，細菌降解有時會成為溶液肽的麻煩， 為克服此，肽應(yīng)溶于無菌水， 或肽溶液用0.2μ M濾膜過濾。 ◎ 多肽的重建和操作 多數(shù)肽溶于無菌蒸溜水。初次溶解時，要注意使初始濃度比要求濃度大，如果多肽僅有限溶解性， 這便允許加入其它溶解劑或緩沖鹽?！ ∪绻嚯脑谒械娜芙庑杂邢蓿袔追N選擇可幫助溶解： 對堿性肽用稀乙酸（含Arg , Lys , His） 酸性肽用稀氨水（含Asp, Glu） 對極疏水的肽用10%有機修飾物（Acetonitnile , Methanol） 極不溶的肽用DM50或DMF guanicline hydrochloride或脲的濃溶液也很有用， 與上述方法合用， 聲處理也是溶解多肽的有效手段。 ◎ 多肽應(yīng)用和保存 多肽具廣泛的溶解性。多肽不溶的主要問題是形成二級結(jié)構(gòu)。除了zui太肽外，這點都會發(fā)生， 在有多重疏水殘基的肽中更顯著。鹽會促進二級結(jié)構(gòu)形成。我們建議先在無菌蒸餾水或去離子中溶解多肽。如需要增加溶解率， 可用聲處理。溶解仍有問題， 加少量稀乙酸（10%）或氨水，會便于溶解?！ ∫L期保存多肽， 冷凍干燥，冷干粉可在-20℃或更低存放幾年而很少或無降解。溶液中的多肽遠不穩(wěn)定。 多肽易受細菌降解，應(yīng)用無菌純化水溶解?！ 『蠱et, Cgs或Try殘基的多肽溶液由于氧化，壽命有限。應(yīng)溶于無氧溶劑， 為防止重復(fù)凍融的破壞， 建議溶解過量的肽的便實驗，其余多肽以固體形成保存。 ◎ HPLC分析和純化 分析HPLC使用柱子和泵系統(tǒng)，可以經(jīng)受傳遞高壓，這樣可以用極細的微粒（3-10μ m）做填料。由此多肽要在幾分鐘內(nèi)高度被分析?！ PLC分兩類：離子交換和反相。 離子交換HPLC依靠多肽和固相間的直接電荷相互作用。柱子在一定PH范圍帶有特定電荷衍變成一種離子體，而多肽或多肽混合物，由其氨基酸組成表現(xiàn)出相反電荷。 分離是一種電荷相互作用，通過可變PH， 離子強度， 或兩者洗脫出多肽，通常， 先用低離子強度的溶液，以后逐漸加強或一步一步加強，直到多肽火柱中洗脫出。離子交換分離的一個例子使用強陽離子交換柱。如sulfoethylaspartimide通過酸性PH中帶正電來分離?！ 》聪郒PLC條件與正常層析正相反。多肽通過疏水作用連到柱上，用降低離子強度洗脫， 如增加洗脫劑的疏水性。通常柱子由共價吸附到硅上的碳氫烷鏈構(gòu)成，這種鏈長度為G4-G8碳原子。 由于洗脫是一種疏水作用。長鏈柱比短鏈對小的， 高帶電肽好。另一方面大的疏水肽用短鏈柱洗脫好。 然而，總體實踐中， 這兩類柱互變無多少顯著差別，別類載體由碳水化合物構(gòu)成， 比如苯基?！ 〉湫偷牟僮鞒Ｓ蓛删R沖劑組成，0.1%TFA-H2o和80% acetonitrile 0.1%TFA--H2o稀acetonitrile。用線型梯變以每分鐘0.5%到1.0%改變的速度混合。常見分析和純化用柱為4.6×250mm(3-10μ m)和22×250mm(10μ m). 如果用徑向填柱，那么大小是8×100（3-10μ m）和25×250mm(10μ m) 大量各種緩沖劑含許多不同試劑，比如heptafluorobutyric酸，0.1%磷酸， 稀He formic酸(5-6%, pH2-4), 10-100mM NH4HCO3, 醋酸鈉/氨，TFA/TEA，磷酸鈉或鉀，異戊酚。這樣許多不同組合可形成緩沖劑，但要注意一點：硅反相柱料不能長時間暴露于高pH，甚至微堿pH， 因為這樣會破壞柱子。 |